مشاهدة النسخة كاملة : التكاثر زراعة الانسجه : tissue culture - تكاثر النباتات البستانيه


الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 09:21 AM
التكاثر زراعة الانسجه : tissue culture - تكاثر النباتات البستانيه


اخواني واخاوتي الكرام ضمن سلسلتنا التي بدانا نشرها لكم والتي كانت في قسم علم النبات وتحت عنوان تكاثر النباتات البستانيه نقدم لكم موضوعا جديدا يعد بحد ذاته موسوعه من المعلومات القيمه عن شيء جديد وحديث في عالم الزراعه الا وهو زراعة الانسجه والذي باذن الله سنتانوله في عدة حلقات لما فيه من زخم في المعلومات من وجهت نظري اعتبرها مرجع واسع لمن يود الخوض في هذا المجال والتي ستكون في هذا القسم قسم نظم الزراعه الحديثه لكي نكون اكثر تنظيما بالنشر والوصول بالمعلومه للجميع ولكي يجدها الجميع بسهوله ... والتي ايضا سنوفر روابط الموضوعات ضمن فهرس الموسوعه في قسم علم النبات .. املين لكم جميعا متابعه قيمه ومفيده وان تجدو معنا كل ما تبحثون عنه من معلومات

واول ما نبدا به هذه السلسله هو فهر لما سيتم تناوله في هذا الموضوع فاهلا وسهلا بكم معنا



ثالثاً: التكاثر بزراعة الأنسجة

مقدمة تاريخية
مصطلحات زراعة الأنسجة Plant tissue culture terminology
مجالات زراعة الأنسجة والخلايا
مراحل زراعة الأنسجة
بيئة زراعة الأنسجة tissue culture media
أساسيات الزراعة بالأنسجة
ملخص لاحتياجات معمل زراعة الأنسجة
إجراءات زراعة الأنسجة العامة General procedures
استخدام زراعة الأنسجة كوسيلة سريعة للتكاثر
الدروس العملية فى مجال التكاثر الخضرى بزراعة الأنسجة





منقول من موقع الحديقة

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 09:24 AM
1- مقدمة تاريخية

-أول من تنبه إلى قدرة الخالق سبحانه وتعالى فى أن كل خلية نباتية منفردة لها القدرة على التكاثر وتكوين نبات كامل والتى عرفت حينئذ بالقدرة الذاتية والتى اعتمد عليها علم زراعة الأنسجة النباتية هو Haberlandt وكانت أول محاولة له عندئذ سنة 1902 ولكنها لم تكلل بالنجاح ولم يفسر فى ذلك الوقت سبب فشله على نحو محدد ولكن عرف فيما بعد أن البيئة الغذائية التى استعملها لم تكن تحتوى على الهرمونات النباتية التى لم يكن معروف دورها الأساسى فى تنظيم انقسام واستطالة الخلايا وكذلك تميزها وتخليقها أى كل ظواهر التكشف المورفولوجى.

-وقد مارس الفسيولوجيين فكرة زراعة الأنسجة النباتية منذ ذلك الحين باعتبارها طريقة ذات قيمة كبيرة بدراسة بعض الظواهر الخاصة بالنمو والأيض وقد بدأت الدراسات الجادة على زراعة الأنسجة والخلايا والأعضاء منذ زمن يقدر بسبعين عاماً تقريباً حينما تمكن العالم White فى عام 1934 من تركيب واستنباط بيئة غذائية تمكن من إنماء جذور الطماطم عليها.

-ثم اكُتشف فى نفس العام 1934 أول الهرمونات النباتية وهى الفيتواوكسين (IAA) 3 indol acetic acid بواسطة كلا من Kagl and Haagen &smith and Erxleben .

-استخدم Guatheret عام 1939 الأكسين لأول مرة بإضافته للبيئة الغذائية وبذلك تمكن من إنتاج نسيج الكلس من زراعة أنسجة نخاع الجزر وفى نفس العام تمكن Whit 1939 من إنتاج الكلس من نبات الدخان.

-اكتشف Van Overbeek and Blakeslee فى عام 1941 أهمية لبن جوز الهند " الإندوسبرم السائل لثمار جوز الهند الغير ناضجة " Coconut Milk فى تشجيعها على إنتاج الكلس عند زراعة أجنة الداتورة . عندئذ تمكن عند الجمع بين الأكسين ولبن جوز الهند من انتاج الكلس فى عديد من النباتات.

-ثم جاءت مجهودات معمل Skoog فى عام 1948 مكللة بالنجاح لتكتشف الكينتين والنى استخدمت مع الأكسين لتكوين الأعضاء المختلفة أو ما يسمى بالتكشف الموفولوجى.

-فى عام 1949 تمكن Nitsch من زراعة مبيض الطماطم لإنتاج نبات كامل .

-فى عام 1952 تمكن Morel and Morting من الحصول على أول نبات خالى من الفيرس باستخدام تكنيك زراعة الأنسجة من نبات الدليا.

-فى عام 1956 تمكن Nickell لأول مرة من زراعة معلقات الخلايا لنبات الفول.

-اكتشف Skoog and Miller عام 1957 أن التوازن الهرمونى بين الأكسين والسيتوكينين هو المسبب لاختلاف التخليق المورفولوجى لأنسجة الدخان والتى ينتج عنها الكلس أو النموات الخضرية أو الجذور العرضية.
-أمكن لأول مرة تخليق الأجنة العرضية من زراعة خلايا الجزر بواسطة Reinert and Steward وذلك فى عام 1958.

-تمكن Cocking عام 1960 من عزل بروتوبلاست الطماطم لأول مرة بعد معاملتها إنزيمياً.

-فى عام 1962 من دراسة لـMurashige and Skoog تم تطوير البيئة الغذائية اللازمة لتنمية كلس الدخان وثبت فيما بعد صلاحيتها لعديد بل معظم النباتات .

-تمكن Baurgin and Nitsch عام 1967 من الحصول على أول نبات أحادى المجموعة الكروموسومية من زراعة متوك نبات الدخان.

-قام Murashige ومساعدوه فى عام 1972 من تطوير تكنيك التطعيم الدقيق للقمم النامية Shoot-apex-micrografting للحصول على نباتات خالية من الفيرس فى الموالح.

-فى عام 1977 تمكن Chilton ومساعدوه من عزل البلازميد من البكتريا لاستخدامها فى إدخال مادة الجين إلى نبات آخر وكان ذلك مدخلاً لما عرف فيما بعد باسم الهندسة الوراثية.

-بعد عام من ذلك أمكن عزل البروتوبلاست من كلا من الطماطم والبطاطس وإحداث التهجين الخلوى بينهما بدمج البروتوبلاست Protoplast fusion وذلك بواسطة كل من Melchers Halder & Sasrristen عام 1978 .

-فى عام 1978 أمكن إنجاز عمل ضخم هو اكتشاف وعزل وتوصيف الإنزيمات الإندونيوكليز المقيدة Restriction enzymes وأطلق عليها هذا لأنها لا تقطع DNA عشوائياً ولكنها تقطعه فى أماكن محددة . وهذا الاكتشاف هو بحق أهم كشف لإمكان عزل الجينات ونقلها وتحقيق أهداف الهندسة الوراثية وقد نال كل من Nathans and Smith عن هذا العمل جائزة نوبل فى العلوم .


2 - مصطلحات زراعة الأنسجة Plant tissue culture terminology

Adventitious: هى أعضاء نباتية ( براعم ، نموات خضرية ، جذور ...إلخ ) نتجت بطريقة عرضية فى موضع غير تقليدى أو فى وقت غير تقليدى مثل تكون النموات الخضرية على نسيج الكلس أو تكون الأجنة العرضية من الكلس بدون مبيض أو عمليات تزاوج وإخصاب.

Aseptic :هو الخلو من الكائنات الممرضة والتلوث بالفطريات والبكتيريا والفيرس ...إلخ أى خلو البيئة الغذائية من الكائنات الدقيقة وهو متطلب هام أساسى لمزارع الأنسجة النباتية.

Axillary bud : برعم أو فرع خضرى إبطى يخرج من إباط الأوراق وهو عادة يتكون من الخلايا المرستيمية الإبطه للقمم النامية وعادة تدفع لإنتاج أعداد كبيرة Mass production ويتم ذلك خلال استخدام الهرمونات التى تعمل على تثبيط السيادة القمية للقمة النامية وتشجيع إنتاج Lateral shoot .

Bud : هو البرعم الخضرى أو الزهرى وهو مازال فى حالة نشأة ولم ينمو بعد Unemerged وعادة ما يكون مغلق بعدة أوراق حرشفية تسمى Bud scale .

Calluses, Calli, Callus : هى أنسجة الجروح التى تتكون عند السطح المجروحة فى النبات وهى أنسجة غير متميزة Disorganized tumor-like masses وهى أنسجة برانشيمية تختلف فى درجة تلجننها وعادة لا يوجد بينها مادة لاحمة الميدلاميلا .

Cybrid : هى الخلية أو النبات الناتج من التهجين السيتوبلازمى مع نواة إحدى الخلايا وعضوات الخلية السيتوبلازمية من أخرى .

Differentiation : التميز أو التخلق أو هى التغيرات الفسيولوجية الحادثة فى خلايا الأنسجة أو الأعضاء أثناء التطور والنمو لتصبح الخلايا أو الأنسجة متخصصة ولها دور فسيولوجى وعمل معين .

Organogenenesis : هى نشأة الأعضاء على سطح المنفصل النباتى أو من الكلس الناتج من زراعته وهى عادة تكون إما نموات خضرية أو جذور .

Disease – free, Pathogen – free, Virus – free, Pathogen – tested : هى النباتات الخالية من أى أعراض مرضية واختبرت فى احتواءها على المسبات المرضية فكانت النتائج سلبية وتستخدم مثل تلك النباتات كمصدر للحصول على نباتات ذات مواصفات مثالية .

Embryoid or Somatic embryo : الأجنة العرضية وهى تشبه مورفولوجياً الزيجوتية وهو ينشأ من أنسجة خضرية تنتج In vitro .

Embryogenesis : هى عملية تكوين الأجنة بطريقة غير جنسية وعادة تنمو الأجنة اللاجنسية مباشرة من زراعةExplant أو بطريقة غير مباشرة من الكلس وفى بعض الحالات العرضية من الخلايا المنفردة .

Excise : هو عزل أو فصل أنسجة أو أعضاء أو قطاعات الأنسجة من النبات كأجزاء نباتية للزراعة بطريقة جراحية مثل عزل القمة النامية تحت الميكروسكوب وزراعتها In vitro .

In vitro : (هى كلمة لاتينية تعنىIn glass ) وتعنى التجارب العملية على الأعضاء النباتية والتى فى الأوعية الزجاجية Glassware والتى تنمو تحت ظروف صناعية Artificial Conditions لزراعة الأنسجة .

In vivo : (وهى كلمة لاتينية تعنى In life ) وهى التجارب العملية على الأعضاء النباتية تحت الظروف الطبيعية وهى مرتبطة بأجزاء النبات الأخرى الحية .

Induction : وهى الحث أو التغيرات الفسيولوجية التى تعمل على حدوث ظاهرة فسيولوجية أثناء عمليات التطور والتى ينتج عنه عملية Initiation .

Initiation : هو أول تغير ميكروسكوبى مرئى لتميز الخلايا وتخليقها عند تطورها إلى أعضاء .

Meristem : هى مناطق النمو والانقسام وتكوين وبناء البروتوبلاست ومنشأ الأنسجة الجديدة فى النباتات وعادة تكون الخلايا المرستيمية خلايا غير متميزة Undifferentiated منها تتكون الأنسجة المتخصصة وظيفياً أو فسيولوجية وتوجد فى القمم النامية للأفرع الخضرية أو قمم الجذور وفى أباط الأوراق وخلايا الكمبيوم الحزمى وأماكن النمو الأخرى مثل الأوراق الحديثة ...إلخ .

Meristemaid: كتلة أو خلايا عنقودية ، من خلايا مرستيمية لها القدرة على النمو والتطور تحتوى على سيتوبلازم كثيف مع عديد من الفجوات العصارية.

Shoot apex or Shoot tip : هى القمة المرستيمية الهرمية أو قبية الشكل Meristematic dome والأوراق المنبسقة Emerging leaves وبعض من خلايا الاستطالة الساقية ويجب عدم الخلط بين مصطلح Meristem tip , shoot tip فالأخير أصغر حجماً ويحتوى على القبة المرستيمية فقط أو زوج واحد من مبادئ خروج الأوراق .

Somatic Hybrid : الهجن الجسيمة وهى الناتجة من دمج الخلايا أو البروتوبلاست لتكوين Genom جديد .

Subculture : هى إعادة الزراعة من زراعة أخرى بنقل الخلايا أو الأنسجة أو الأعضاء المتكونة على بيئة جديدة وذلك بعد مرور زمن فاصل يسمى Passage time وفى الغالب تكون البيئة الجديدة لها تركيب مختلف فى واحد أو أكثر من مكونات البيئة للحصول على شكل مورفولوجى جديد أو تطور للأعضاء وكثيراً ما يخلط البعض بين مصطلح Subculture – Reculture الأخير يستخدم فى نقل الأنسجة أو الأعضاء على بيئة غذائية طازجة لها نفس المكونات للبيئة السابقة ويكون الغرض هنا المحافظة على النسيج من التدهور نظراً لجفاف البيئة أو إنقاذ محتوياتها أو تغير درجة حموضتها أو صلاحيتها ولكن تظل الأنسجة فى نفس المرحلة من التطور .

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 09:25 AM
3 - مجالات زراعة الأنسجة والخلايا

توجد أربعة مجالات رئيسية لزراعة الأنسجة والخلايا نجملها فى المجالات التالية:
1-إنتاج بعض المواد الكيماوية العلاجية والمواد الطبيعية.
2-التحسين الوراثى للمحاصيل.
3-الحصول على سلالات خالية من الأمراض.
4-استخدام زراعة الأنسجة كوسيلة سريعة للتكاثر وإنتاج غزير من النباتات.

أولاً: إنتاج المواد الكيماوية الطبية والمواد الطبيعية Production of pharmaceutical and other natural products
كما هو معروف فإن هناك عديد من النباتات التى تنتج مواد طبيعية تعتبر إحدى نواتج عمليات التمثيل الغذائى يقوم الإنسان باستخراجها واستعمالها فى صناعات عديدة أهمها صناعة الدواء وإنتاج الزيوت العطرية ومكسبات النكهة والطعم. والأمثلة على ذلك عديدة نجملها فى الجدول التالى :


جدول (1) يوضح أهم المركبات الفعالة التى تستخرج من النياتات الطبية والعطرية بزراعة الأنسجة المادة

اسم النبات المستخرجة منه1- القلويدات

- أتروبينالأتروباAtropa belladonna


- أفيدرينEphedra Vulgaris


- لينينCinchona spp.


- كوكاييننبات الكولا Erythroxylon coca


-هيوسيامينالسكرانHyscyamus spp.


- ستريكتينالجوز المقئ Strychnase sp.


- كافينالبنCoffea Arabica


2- الجلوكسيدات

- الأميجداليننوى الخوخ والمشمش والبرقوق .


- السالسينالصفصاف .


- زيت المستطردةنباتات الفصيلة الصليبية .


3 - الزيوت العطريةعديد من النباتات


4- الفيتاميناتعديد من النباتات





ولقد أمكن استخدام زراعة الأنسجة لبعض النباتات الطبية مثل الداتورة والسكران والديجتالس لإنتاج المواد الطبية وكذلك بعض النباتات العطرية مثل الريحان والنعناع والعتر لإنتاج الزيوت العطرية وذلك بزراعة أنسجة أو أعضاء مختلفة من تلك النباتات للحصول على نسيج الكلس ثم يستخلص المادة الفعالة منه دون الحاجة لزراعة النبات بأكمله وبذلك يمكن توفير مساحات الأراضى اللازمة لزراعة هذه النباتات وكذلك توفير المجهود الزراعى وكذلك المجهود اللازم لاستخراج هذه المواد من النبات الكامل وربما يكون ذلك التكنيك من الناحية الاقتصادية أكثر نفعاً . ويعتبر هذا المجال من مجالات زراعة الأنسجة الحديثة التى لم تطرق بعد بالقدر الكافى لأنه من المتوقع أن يكون من أهم المجالات لاستخدام زراعة الأنسجة فى المستقبل القريب.



ثانياً: التحسين الوراثى للمحاصيل The genetic improvement of crops :
يخدم تكنيك زراعة الأنسجة والأعضاء والخلايا مربى النبات فى مجالات مختلفة نجمعها فى الآتى:



Embryo development-
- Embryo & Ovary culture
- Induction and isolation of mutation.


- Source of variation .


- Cell & tissue culture
- Haploid plants development
- Anther & microspore
- Mutation


- Hybridization


- Gene transfer


- Protoplasts










أن البحث عن التراكيب الوراثية أو مصادر الاختلافات الوراثية وإنتاج أصناف جديدة لهو الشغل الشاغل لمربى النبات وهو فى صدد هذا الهدف قد يواجه بعدة عقبات يمكن تزليلها بتكنيك زراعة الأنسجة والأعضاء.

1- ثبت أن الأجنة الناتجة من الهجن المتباعدة الآباء لا يتم تكوينها ونضجها مثل الأجنة الناتجة عن الهجن الجنسية والنوعية، تلك الأجنة تعانى من ظاهرة تعرف بظاهرة العقم الأندوسبيرمى Somatoplastic sterility وتنتج من عدم التوازن الكروموسومى لأنسجة الإندوسبرم والجنين فكما هو معروف أن الأجنة لا تتصل مباشرة بالأنسجة الوعائية لنبات الأم ولكن يتم الاتصال عن طريق الإندوسبرم والذى يستقبل المواد الغذائية ثم يقوم بتوصيلها للجنين عن طريق الحيل السرى . وبالفحص السيتولوجى لمثل تلك الأجنة الهجينة ثبت أن الزيجوت ينقسم عدة انقسامات أولية كالمعتاد ثم يتكون فى قاعدة البويضة أى بين الحبل السرى والطرف الكلازى منطقة بها خلايا غير حية تمنع من وصول الغذاء للأندوسبرم وعندئذ يموت نسيج الإندوسبرم والذى يعقبه موت الجنين فإذا أمكن عزل الأجنة الجنسية فى وقت مناسب وتنميتها على بيئة مناسبة فإنه يمكننا الحصول على تلك الأجنة فيما يعرف بزراعة الاجنة Embryo culture وهو هدف عظيم لمربى النبات .

2- عند سعى مربى النبات فى الحصول على قوة الهجين يواجه بعدة مشاكل أهمها طول القترة بين الأجيال والتى تطيل من برامجه فضلاً على صعوبة الحصول على نباتات متماثلة فى صفاتها الوراثية Homozyous لذلك يتطلب منه تأصيل العوامل الوراثية بالتربية الذاتية أو التهجين الذاتى لعدة أجيال فيواجه بأن نباتات الجيل الثالث أوالرابع تكون عديمة الخصوبة مما يوقف من برامجه لذلك فإن حصوله على نبات أحادى المجموعة الكروموسومية Haploid يعتبر من الآمال العظيمة لمربى النبات حيث يمكنه مضاعفتها بالكولشيسين فيحصل على نبات ثنائى المجموعة الكروموسومية وفى نفس الوقت أصيل فى عوامله الوراثية Homozygous وذلك باستخدام مجال زراعة الأنسجة بزراعة المتك أو حبة اللقاح لإنتاج نبات أحادى المجموعة الكروموسومية وفى وقت قصير جداً بالمقارنة بالطريقة التقليدية .

3- من أهم طرق التربية هو البحث عن تراكيب وراثية عن طريق الانتخاب لذلك تصعب تلك المهمة على مربى النبات إذا تضاءلت أمامه وجود مصادر الاختلافات الوراثية أما إن توافرت فيكون أمامه مهمة صعبة وهى عمل Screening لعدد كبير من النباتات وهى مهمة ولكن باستخدام تكنيك زراعة الأنسجة ومعلقات الخلايا يمكن لمربى النبات معملياً أن يتعامل مع عشيرة كبيرة جداً فى فى طبق بترى فيسهل عليه مهمة الانتخاب إذ أن الانتخاب سوف يجرى على مستوى الخلية وليس على مستوى النبات الكامل وفى هذا المجال يمكن لمربى النبات أن ينتخب لصفات عديدة مقل مقاومة الأمراض ، مقاومة الملوحة ، مقاومة سُمية المبيدات ، مقاومة النيماتودا ، مقاومة الجفاف .. الخ. ويتم ذلك بالحصول على مزارع للخلايا ثم تعامل بسموم الفطر المسبب للمرض أو بتركيزات عالية من الملح أو بتركيزات مختلفة للمبيد ثم تنتخب الخلايا التى تقاوم الصفة المرغوبة فتنتقل إلى بيئة غذائية لتكوين الكلس ثم يوجه الكلس نحو تخليق الأعضاء الخضرية والجذرية وبذلك يمكن الحصول على نبات كامل كما يمكن بنفس التكنيك استحداث الطفرات وعزلها .

4- قد يصعب على مربى النبات إجراء التهجينات الجنسية والنوعية عند الرغبة فى نقل صفة ما من نبات إلى آخر لكن عن طريق التكنيك الجديد وهو ما يعرف بتكنيك الهندسة الوراثية وزراعة البروتوبلاست يمكن إجراء تلك التهجينات فضلاً على إمكانية عزل جين بمفرده ونقله ليدمج مع المادة الوراثية لنبات مراد إدخال صفة ما فيه بالإضافة إلى إمكان نقل أى مادة وراثية معزولة من أى كائن حى إلى النبات وقد كان وذلك بالطبع مستحيل باستخدام الطرق التقليدية.

ثالثاً : الحصول على سلالات خالية من الأمراض Pathogen free plants :

تصاب كثير من النباتات بالأمراض الفيروسية ويبذل الدارسون جهداً كبيراً للحصول على نباتات خالية من الإصابة ويستخدم تكنيك زراعة الأنسجة فى الحصول على تلك النباتات بطرق عدة:

1- زراعة القمم النامية حيث وجد أن الفيرس ينتقل بصعوبة وبطء إلى قمم النباتات وبالتالى فهى غالباً ما تكون خالية من الفيرس خاصة إذ عزلت بأحجام ميكروسكوبية تصل إلى 0.2 – 0.5 ملليميتر وزراعتها للحصول منها على نبات كامل .

2- الحصول على نباتات خالية من الفيروس فقد تمكن Murashige et al 1968 من الحصول على نباتات خالية من الفيروس من نسيج النيوسلة لبعض النباتات أحادية الأجنة Monoembryonic فى الموالح (الشادوك) وفى تلك الحالة أمكن إنتاج نباتات خالية من الفيروس وفى نفس الوقت مشابهة للأم من حيث الصفات أنها أجنة جسمية.

3-استخدام التطعيم الدقيق نظراً لصعوبة الحصول على نبات كامل من زراعة القمة النامية مباشرة على بيئة غذائية فى بعض النباتات فقد استحدث هذا التكنيك Shoot tip micrografing وذلك بزراعة بذور الأصل فى الظلام ثم عزل القمة النامية بطول 0.14 – 0.18 ملليميتر وتطعيمها على بادرة الأصل وبذلك نحصل على شتلة مكونة من أصل وطعم وخالية من الفيروس بعد عدة أسابيع.


رابعاً: استخدام زراعةالأنسجة كوسيلة سريعة للتكاثر Rapid clonal multiplication

نظراً لأن طريقة التكاثر الخضرى بالوسائل التقليدية ليست سريعة بالدرجة الكافية لمواجهة الطلب المتزايد على النباتات خاصة نباتات الزينة فإن أسعار تلك النباتات فى الزيادة فى جميع بلدان العالم مما دفع الكثير إلى استخدام تكنيك زراعة الأنسجة لتوفير تلك الأعداد من النباتات بسعر مناسب فى حيز محدود. كما نجح إكثار بعض النباتات الصعبة الإكثار والغالية مثل الأوركيد بذلك التكنيك كما أمكن إنتاج أعداد كبيرة من نخيل البلح والذى يمتاز بقلة خروج الفسائل عليه وارتفاع أثمانها .

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 09:44 AM
مراحل زراعة الأنسجة :

للوصول إلى الأهداف السابقة الذكر فإن هناك ثلاثة مراحل رئيسية للحصول على زراعة ناجحة للأنسجة وهى:

أولاً: الحصول على مزرعة معقمة Stage І : Establishment of a septic culture


هذه المرحلة هامة جداً وتعتبر من أهم مراحل زراعة الأنسجة والغرض منها ببساطة هو الحصول على مزرعة معقمة بمعنى عدم تلوث البيئة الغذائية المستعملة أو الأنسجة المستخدمة فى الزراعة Explants بأى كائن دقيق يسبب تعفنها وموتها . ويأتى ذلك بتعقيم الأدوات المستعملة وتعقيم البيئة المستخدمة وكذلك تعقيم الأنسجة المستعملة والتى تكون عبارة عن أجزاء من النبات المراد إكثاره مثل القمم النامية للسيقان والجذور أو أجزاء من السيقان أو الأوراق أو نسيج الكلس ..............الخ. ثم إتمام الزراعة أيضاً فى جو وحيز معقم.

ثانياً: زيادة الأعضاء المتكاثرة Stage П : Multiplication of propagula

لهدف من تلك المرحلة هو زيادة الأعضاء والتراكيب التى تعطى فى النهاية النبات الكامل لذلك تعتمد تلك الخطوة على زيادة إنتاج الأعضاء العرضية Adventitious organs أو زيادة تكوين الأجنة أو زيادة تنشئة النموات الجانبية Axillary shoots وعندما يكون الكلس خطوة وسطية يكون الهدف فى تلك المرحلة هو زيادة نمو الكلس ثم تخليق النموات العرضية الخضرية منها أو تكوين الأجنة الجسمية Somatic embryo والجدول (2) يبين الطرق المختلفة لزيادة Propagula فى هذه المرحلة Stage

جدول (2) أهم النباتات التى نجحت بزراعة الأنسجة ومصدر المنفصل النباتى وطرق تضاعفها



http://im28.gulfup.com/2012-04-06/1333696660251.png
http://im17.gulfup.com/2012-04-06/1333696815391.png
http://im17.gulfup.com/2012-04-06/1333696815391.png

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 09:57 AM
ثالثاً: الإعداد لنقل النبات للتربة Stage Ш : Preparation of re-establishment of plant

يمكن اعتبار أن التكاثر عن طريق زراعة الأنسجة ناجحاً إذا توج بنجاح نقل النبات الناتج فى الأنبوبة المعقمة إلى التربة واستمرار نموه وللوصول لهذه الغاية يجب العمل على أقلمة أو تقسية النباتات Hardening of plant قبل نقلها للظروف الصعبة المحتمل أن تواجهها فى التربة مثل نقص الرطوبة Stress tolerance to moisture خاصة إذا علمنا أن تلك الأنسجة تعتبرنامية فى وسط مائى Heterotrophic وسوف تنتقل إلى وسط آخر Autotrophic state . كذلك يجب استيفاء تلك النباتات لاحتياجاتها الحرارية أن وجدت لإنهاء طور الراحة كما للأبصال وللكورمات والريزومات احتياجات البرودة Chilling requirement فيجب استيفاءه قبل نقلها للتربة .


احتياجات كل مرحلة Requirements of each stage :
إحتياجات كل مرحلة تشمل احتياجات غذائية بمكونات البيئة وطبيعتها واحتياجات بيئية أى تعرض الأنسجة لدرجات حرارة وشدة إضاءة معينة. وعند دراسة المرحلة الأولى يجب ألا نغفل أن نجاح التكنيك يعتمد أساساً على حسن اختيار الجزء المنزرع Explants أما المرحلة الثانية فإن نجاحنا يتحدد بمعرفتنا إلى طريقة زيادة الأعضاء العرضية المتكونة مثل النموات العرضية والأجنة الخضرية والنموات الجانبية ..الخ. أما فى المرحلة الثالثة فيجب أن نكون ملمين بالاحتياجات الفسيولوجية للنبات المتكون كاحتياجه مثلاً لكسر طور سكونه إن كان له طور سكون أواحتياجه إلى معاملات خاصة للتقسية مثل تعريضه إلى إضاءة ذات شدة عالية High intensity light .


وفى جدول 3 سوف نسوق ثلاث أمثلة لنباتات Bromeliads, Gerbera, Asparagus لتوضيح احتياجات كل مرحلة من الهرمونات والاحتياجات البيئية وكذلك طبيعة البيئة الغذائية لكل لنبات .


جدول (3) يوضح أهم الاحتياجات المصاحبة لكل مرحلة من مراحل زراعة الأنسجة لثلاثة من النباتات CharacteristicAsparagusGerberaBromelaidsStage І- - ExplantO.15mm shoot tip
2- 3mm shoot tip
Lateral bud
- MediumAgar, Ms salts + O.3mg NAA+O.1 Kinetin
Agar, Ms salts 0.5IAA+ 10 Kinetin
Liquid, 1 rpm1.75IBA+1.75NAA+150mg/L citric acid
- culture environment27c, 16 hr daily 1000LUX
27c, 16 hr, l000LUX
27c 16 hr, LUX
Stage П- Method of MultiplicationAxillary shoot,
adventitious rootAxillary shootAdventitious shoot- MediumNone changeNone changeLiquid MS, 2 IAA+2K 80mg/L adenine sulfate 170mg/LNaH2PO4H2O- Culture EnvironmentNone changeNone changeNone changeStage Ш- MediumRemove NAARemove Kinetin increase IAA to l0mg/LRemove K, Adenine sulfate, NaH2 PO4. H2O - Culture EnvironmentIncrease light to 10,000 LUXIncrease light to10,000 LUXIncrease light 3000 LUX






http://im24.gulfup.com/2012-04-06/1333697301551.png

http://im9.gulfup.com/2012-04-06/1333697423551.png

http://im16.gulfup.com/2012-04-06/1333697482231.png

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:49 AM
5 - بيئة زراعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11295/)الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11295/)Tissue (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11295/)culture (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11295/)media

تختلف البيئة المناسبة لزراعة الأنسجة تبعاً لاختلاف النسيج المستعمل وطور النمو اختلافاً كبيراً. لذلك فإن هناك العديد من البيئات الغذائية التى تسمح للباحث فرصة الاختيار من بينها وتتركب البيئة الغذائية من الأتى:


أ‌-الأملاح الغير العضوية Inorganic salts تشمل العناصر الكبرى مثل النيتروجين ، البوتاسيوم ، الفوسفور ، الماغنسيوم ، الكبريت والعناصر الأخرى وتشمل الحديد ، المنجنيز ، النيكل ، الكوبالت ، الزنك ، والبورون ، المولبيدنيم. وهناك العديد من مخاليط الأملاح مثل مخلوط أملاح Murashige & Nitsch & Nitsch 1969, White 1963 Skoog1962 إلخ. ويمكن تعديل تركيز تلك الأملاح لتلائم الاحتياجات الخاصة لبعض الحالات ولحسن الحظ وجد أن كثير من النباتات وتقريباً كلا الأعضاء تتشابه فى احتياجاتها الغذائية من العناصر الكبرى والصغرى وقد نجحت بيئات N & N formula, MS formula, White formula فى زراعة العديد من النباتات . وفى بعض الحالات يرغب فى زيادة تركيز الفوسفات الغير عضوى ويتم ذلك بإضافة 170 مليجرام / لتر من فوسفات الصوديوم الأحاديةNaH2Po4H2O



وجدول (4) يبين عديد من المخاليط المستخدمة فى البيئات المختلفة.

Molecular weight of the compounds commonly used in tissue culture media
Compound
Chemical formula
Molecular weight
Macronutrients
Ammonium nitrate
NH2NO4
80.04
Ammonium sulphate
(NH4)2SO4
132.15
Calcium chloride
CaCI2. 2 H2O
147.02
Calcium nitrate
Ca(NO3)2. 4H2O
236.16
Magnesium sulphate
MgSO4.7H2O
246.47
Potassium chloride
KCl
74.55
Potassium nitrate
KNO3
101.11
Potassium dihydrogen ortho-phosphate
KH2PO4
136.09
Sodium dihydrogen ortho-phosphate
NaH2PO4. H2O
156.01
Micronutrients
Boric acid
H2BO2
61.83
Cobalt chloride
CoCl2.6 H2O
237.93
Cupric sulphate
CuSO4.5 H2O
249.68
Magnesium sulphate
MnSO4.4H2
223.01
Potassium iodide
KI
l66.0l
Sodium molybdate
Na2MoO4.2H2O
241.95
Zinc sulphate
ZnSO4.7H2O
287.54
Sodium EDTA
Na2EDTA.2 H2O(C12H14N2O2Na2.2 H2O)
372.25
Ferrous sulphateFerric-sodium EDTA
FeSO4.7H2OFeNa.EDTA(C12H12FeN2NaO2)
278.03367.07
Sugars and sugar alcohols
Fractose
C6H12O2
180.15
Glucose
C6H12O4
180.15
Mannitol
C6H14O4
182.17
Sorbitol
C6H14O6
182.17
Sucrose
C12H12O12
342.31
Vitamins and amino acids
Ascorbic acid (Vitamin C)
C6H2O4
176.12
Biotin (Vitamin H)
C12H14N2O2S
244.31
Calcium pantothenate (Ca salt of vitamin B,)
(C6H12NO3)2Ca
476.53
Cyanocobalamine (Vitamin B)
C12H22CoN14O14P
1357.64
L. Cysteine HCl
C2H2NO2S.HCI
157,63
Folic acid (Vitamin B Vitamin M)
C14H19N2O4
441.40
Lnositol
C6H12O
180.16
Nicotinic acid or Niacin (Vitamin B)
C6H2NO2
123.11
Pyridoxine HCl (Vitamin B)
C9H12NO2.HCl
205.64
Thiamine HCl (Vitamin B)
C12H17CIN4.OS.HCl
337.29
Glycine
C2H2NO2
75.07
L. Glutamine
C2H14N2O2
146.15

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:50 AM
- السكريات Sugars: من الدراسات المبكرة فى هذا المجال البحث عن افضل مصادر الطاقة فى البيئة الغذائية افترض أن السكريات الأحادية كالجلوكوز سوف تكون فعالة ومقبولة كمصدر للطاقة ولكن White 1963 وجد أن السكروز يعتبر من أحسن المواد من جهة إنتاج الطاقة بالنسبة لجذور الطماطم ثم أشار Murashige & Shoog بأن هناك عدة سكريات خلاف السكروز يمكن استعمالها سواء كانت سكريات أحادية أو ثنائية أو ثلاثية مثل الجلوكوز والفركتوز والمانتوز والجلاكتوز والمالتوز و الرافنوز أما السرببول والمانيتول فقد وجد أن النبات لا يمكن استخدامها والاستفادة منها وقد وجد أن نسبة 2 إلى 4 % تكون ملائمة لزراعة الأجنة 50 % مناسبة لزراعة القمم النامية ، 7.5 % مناسبة لإجراء Micrografating

ج - الفيتامينات Vitamins : إحدى المكونات الهامة فى بيئات زراعة الأنسجة وعادة يستخدم فيها الفيتامين Thiamin (V.B) وحمض النيكوتين Nicotinic acid والبيرودكسين Pyridoxine وهى جميعها مرافقات أنزيمية هامة كذلك يستخدم الريبوفلافين Riboflavin فى معظم مزارع المتوك ويشاطره فى الأهمية فيتامين البيوتين Biotin كما يستعمل الأنيوسيتول Inositol بتركيز 100 جزء فى المليون ، وهو من المواد الحيوية المنظمة وبالنظر لعدم وضوح متطلبات كل جزء نباتى من الفيتامينات للنمو وله صورتان Meso, Myo لذلك تضاف كأسلوب وقائى وتجنباً لاحتمالات التأثير فى طبيعة نمو تلك الأجزاء النباتية المزروعة فى الوسط الغذائى .



وجدول (5) يبين المخاليط المختلفة من الفيتامينات المستخدمة فى البيئات المختلفة

Some Vitamin Mixtures for Plant Culture Media ( Mg per L Medium)
Vitamin

Constabel
1958
(3)

Gambog
1908
(34)

Hendersom
Durrell&
Bonner
1952
(35)

Morel&
Wetmore
1951
(36)

Nickell&
Mnretzki
1909
(37)

Paeis&
Duhmet
1953
(38)

Reinert&
White
1950
(39)

White
1903
(33)

p-Aminobenzoic acid

0.2

0.05

Ascorbic acid

10

0.4

Biotin

0.1

0.00025

0.005

0.01

0.01

0.002

0.01

Choline chloride

10.0

0.2

0.1

10.0

Cyanocobalamin

0.0015

Folic acid

1.0

0.015

0.1

0.0003

Nicotinic acid

0.5

0.5

0.5

1.0

2.8

0.06

0.5

0.5

Calcium pantothenate

10.0

0.4

0.8

1.0

5.0

0.1

Pyridoxine hydrochloride

0.5

0.1

1.0

0.2

0.001

0.1

0.1

Riboflavin

0.1

0.015

0.05

0.2

0.001

0.1

Thiamine hydrochloride

0.1

0.5

0.1

1.0

0.03

0.005

0.1

0.1

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:51 AM
- الأحماض الأمينية والأميدات Amino acids and Amides إضافتها للبيئة عادة ما يكون مفيداً خاصة الأرجنين وحمض الأسبارتيك وحمض الجلوتاميك والتيروزين وجدول (6) يبين أهم الأحماض الأمينية والأميدات المستخدمة فى زراعة الأنسجة والمخاليط منها . وترجع أهميتها فى زيادة نمو الكلس وليس فى تكوين الأعضاء ويجب أن يستعمل التشابه الأيزوميرى L وليس D لتلك المركبات .


جدول 6 يبين المخاليط المختلفة من الأحماض الامينية والاميدات المستخدمة فى البيئات المختلفةMixtures of Amino Acids and Amides Employed in Plant Culture Media (ppm)

http://img811.imageshack.us/img811/8343/capture1xd.jpg (http://www.alhadeeqa.com/vb/arbah.php?url=%61%48%52%30%63%44%6f%76%4c%32%6c%74 %5a%7a%67%78%4d%53%35%70%62%57%46%6e%5a%58%4e%6f%5 9%57%4e%72%4c%6e%56%7a%4c%32%6b%76%59%32%46%77%64% 48%56%79%5a%54%46%34%5a%43%35%71%63%47%63%76)

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:51 AM
هـ- المواد الطبيعية


قد لا نستطيع توفير احتياجات الأجزاء المزروعة من الأحماض الأمينية بصورة دقيقة لذلك تضاف الاحماض الامينية فى صورة طبيعية كالآتى :




1- Hydrolyzed protein preparation : casein Hydrolysates, Soya peptone .
مستخلص الخميرة والشعير 2- Malt and Yeast extract
لبن جوز الهند، آندوسبرم الذرة 3- Endosperm fluids ( Coconut, Corn )
لب الموز، عصير الموالح والطماطم 4- Fruit juice ( banana, orange, tomato )




وعادة لا تستعمل المواد الطبيعية إلا فى حالة فشل البيئات فى آنماء النسيج أو عند الرغبة فى زيادة التأثير المنبه وهى عادة تحتوى على عديد من الفيتامينات والأحماض الأمينية.


و- منظمات النموPlant regulators :

تعتبر منظمات النمو من أهم مكونات البيئة وبدونها قد لا نحصل على أى نجاح من زراعة الأنسجة والأعضاء والخلايا. وتشمل منظمات النمو المستعملة كل من الأوكسين والسيتوكيين بأنواعها المختلفة كما فى الجدول رقم (7) وترجع أهميتها إلى دورها فى انقسام واستطالة الخلايا وكذلك فى قدرتها على إحداث التخليق وتكشف الأعضاء المختلفة. يستخدم الأوكسين مثل 2,4-D , NAA, IAAلتكوين الكلس واستحداث تكون الاعضاء العرضية وقد وجد أن تأثير IAA ضعيفاً مقارنة بالأوكسينات الأخرى أما 2,4-D فكان أقواهم خاصة فى حثه على تخليق الأجنة العرضية أو تكوين الكلس . أما السيتوكينيات فيعتقد أن تأثير كل من الكينتين والبنزيل أدنين متساويين يستعملان بتركيزات من 1 – 10 جزء فى المليون ويعتقد ً أن مركب 2 ip أفضلهم فى تأثيره . أما عن حمض الجبرلين فإنه له دور أيضاً فى نمو الأعضاء وتخليقها وقد أشار Gautheret 1969 أن الجبرلين يمكن أن يكون بديل للضوء أو يعوض الاحتياجات الضوئية فى تنشيطها لتخليق الجذور فى نبات الطرطوفة وعادة يمكن استعماله فى المرحلة الثالثة StageШ للإسراع من عملية تكوين الأعضاء قبل نقلها للتربة كما يستعمل الجبرلين لزيادة نمو الأجنة الخضرية


جدول (7) يبين أهم الهرمونات النباتية وووزنها الجزيئ المستخدمة فى زراعة الأنسجة
الرمز

الهرمون

الوزن الجزيئ

الاوكسينات Auxins

pCAA

P chlorophenoxy acetic acid

186.59

2,4-D

2,4- dichlorophenoxy acetic acid

221.04

IAA

Indole- 3- acetic acid

175.18

IBA

3 – indole butyric acid

203.23

NAA

@ naphthalene acetic acid

186.20

NOA

& naphthoxy acetic acid

202.20

السيتوكينينات Purines / Cytokinins

Ad

adenine

189.13

AdSO4

adenine sulphate

404.37

BA or BAP

6- benzyl adenine or 6- benzyl amino purine

225.20

2 IP

6- dimethyl allyl amino purine or
N- isopentenyl amino purine

203.30

Kin

6- furfuryl amino purine

215.21

SD8339

6- (benzylamino)-9-(2-tetrahydropyranyl)H- purine

309.40

Ze

6(4-hydroxy-3-methlbut-2-enyl amino purine

219.20

الجبرلينات Gibberellins

GA3

Gibberellic acid

346.37

المركبات الاخرى Other compounds

ABA

Abscissic acid

264.31

colchicine

399.43

PG

phloroglucinol

126.11

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:54 AM
http://www.youtube.com/watch?v=3pkm6Vio_Q0&feature=player_embedded

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:56 AM
http://www.youtube.com/watch?v=ltbdM3boWmU&feature=player_embedded

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:57 AM
http://www.youtube.com/watch?v=d5gEEFY3ObU&feature=player_embedded





http://www.youtube.com/watch?v=6lLUL1KVVkA&feature=player_embedded

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 10:59 AM
جهاز قياس الحموضةPH meter

http://img.diytrade.com/cdimg/340477/4537083/0/1193388897/pH_Meter.jpg

http://image.made-in-china.com/2f0j00rvFEjReKZGcV/PH-Meter.jpg

الاوتوكلاف

http://www.studentals.net/stu/imgcache/3079.imgcache.jpg

اجهزة تقطير الماء


http://www.sptechs.com/emarket/thumbs/products/item8268.gifhttp://forum.moe.gov.om/~moeoman/vb/attachment.php?attachmentid=5578&stc=1&d=1252674916

الهزازshaker

http://www.nu.edu.sa/userfiles/mfammar/7.png

http://img.medwow.net/laboratory-shaker.dth1499_157_132.jpg


المصدر: منتدى الحديقة

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:03 AM
أساسيات الزراعة بالأنسجة

أولاً:العمل فى جو معقم Aspect work
تشتمل زراعة الأنسجة على عزل وزراعة خلايا منفردة أو أنسجة أو أعضاء نباتية من أجزاء النبات وزراعتها على بيئة غذائية سائلة أو شبه صلبة تحتوى على مكونات متكاملة حيث تشمل مصدر للكربون فى صورة السكريات مثل السكروز ومصدر للعناصر الكبرى والصغرى مثل النيتروجين والفوسفور والبوتاسيوم والكالسيوم والماغنسيوم والكبريت والحديد والمنجنيز والنيكل والكوبلت والزنك والنحاس والبورون والمولبيدنيم. كذلك تحتوى البيئة الغذائية على الفيتامينات والهرمونات بتركيزات متوازنة مما جعل البيئة الغذائية وسط ملائم لعديد من الفطريات والبكتريا التى تنتشر فى الجو والتى يمكن لها أن تتطفل على تلك البيئة الغذائية الغنية مما يؤدى إلى تلوثها لذلك كان من الواجب أن يتم تعقيم البيئة قبل استخدامها فى الزراعة وتعقيم الأدوات المستعملة وكذلك تعقيم الأنسجة " المنفصل النباتى " Explant المنزرعة فضلاً على اتمام الزراعة فى جو خالى من الكائنات الدقيقة التى تؤدى إلى تلوث تلك الزراعات وذلك بإتمام العمل داخل غرفة معقمة أو كابينة معقمة Clean Environment .

http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/tissue.gif



ثانياً:التحكم فى الجو البيئى Environment Control
بعد إتمام عملية عزل الخلايا أو الأنسجة أو الأعضاء النباتية وزراعتها على البيئة الغذائية المناسبة يجب أن تحضن فى جو ملائم تتوفر فيه نسبة الرطوبة الملائمة ودرجة الحرارة وشدة الإضاءة المناسبة لذلك يجب توفر غرفة تحضين أو حضانة يمكن التحكم فى درجة حرارتها وشدة إضاءتها. كذلك يجب أن تشتمل على أرفف لوضع حوامل الأنابيب أو الدوارق وتعرض تلك الأرفف إلى إضاءة مناسبة حسب مرحلة الزراعة وتزود وحدة الإضاءة بميقاتى للتحكم فى طول فترات الإضاءة .



http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/tss.gif



ثالثاً:الإمكانيات المعملية Laboratory Facilities

1-استعدادات النظافة Provision of clean
يجب أن يكون هناك إمكانيات عالية لنظافة معمل زراعة الأنسجة ومداومة ذلك بشكل روتينى يومى حتى يتحقق النجاح باستمرار فى استخدام هذا التكنيك بكفاءة عالية، ويتم ذلك بشفط الأتربة ميكانيكياً ومسح وترطيب الأرضيات وتنظيف المناضد والنوافذ والحضانات والثلاجات تنظيفاً جيداً. كذلك يجب غلق الأبواب غلقاً محكماً. كذلك يجب أن تكون الجدران والأرضيات والأسطح جميعها ناعمة الملمس سهلة التنظيف ويفضل أن تصنع أسطح المناضد Bench Surface من مادة الفورميكا Formica .

2-عمليات الغسيل Washing up
يجب أن تتم عمليات غسيل الأدوات والزجاجيات والدوارق والأنابيب غسلاً جيداً باستعمال الماء الدافئ لذلك يجب أن يحتوى معمل زراعة الأنسجة على مصدر للماء الدافئ فضلاً على ماء مقطر وذلك لشطف الزجاجيات به ولاستعماله فى تحضير البيئات. ويفضل الماء المقطر مرتين والمعروف باسم Double distilled water كذلك يفضل استخدام الماء الخالى من الأملاح خاصة الصغرى منها لسميتها للأنسجة الرهيفة المزروعة مثل النحاس لذلك يستعمل الماء المعاد تقطيره والمعروفة De-ionizer وفى حالة عدم توافر تلك الإمكانيات يمكن أن يمرر الماء المقطر مرتين على مرشح ايونى Ion exchange لفصل الأملاح المتأينة على الرزين وبذلك نحصل على ماء مقطر لثلاث مرات Triple distilled water وعند الرغبة فى تخزين الماء المقطر يجب أن يكون ذلك فى آنية مغطاة زجاجية أو بلاستيكية محكمة ويفضل عدم استعمال الماء المخزون لفترة طويلة حتى لا يكون قد تلوث بالطحالب والفطريات ويجب غسيل آنية الماء دورياً The containers should be cleaned regularly . ولعمليات الغسيل يجب أن يتوفر لها صوانى بلاستيكية Plastic bowls or plastic bucket وذلك لنقع الأنابيب والزجاجيات والأطباق البترى فيها فترة قبل الغسيل بالفرشاة . وبعد الغسيل تشطف عدة مرات بالماء المقطر وتترك عندئذ لتصفية الماء على الحوامل ثم تجفف بعد ذلك فى الفرن قبل تخزينها فى دولاب الزجاجيات لحمايتها من الأتربة.

ويفضل أن يحتوى معمل زراعة الأنسجة على ماكينة أتوماتيكية للغسيل Automatic washing machine لإجراء عمليات الغسيل الدورى ولتسهيل العمل ويجب الأخذ فى الاعتبار أن الغسيل اليدوى يفضل فى بعض الحالات . ويجب التخلص من النفايات والزجاج المكسور والبيئات الملوثة بعد تعقيمها بالأتوكلاف وذلك باستعمال أكياس من البلاستيك ذات الحافة المغلقة لكى تغلق باستمرار وتستبدل يومياً لتقليل التلوث بالمعمل والمحافظة على نظافته.

3-إعداد البيئة وتخزينها Media preparation and storage
تحضر البيئة الغذائية كما سبق الذكر من الأملاح المعدنية والفيتامينات والهرمونات والسكر بالإضافة إلى الأجار وعادة تحضر البيئة فى صورة Stocks عالى التركيز من كل من الأملاح والفيتامينات والهرمونات . وذلك يرفع تركيز تلك المواد إلى عشرة أضعاف × 10 أو مائة × 100 وتخزن تلك الـStocks فى زجاجات داكنة اللون أو فى قنينات زجاجية أو بلاستيكية Glass plastic vials وذلك داخل أماكن باردة وتشمل ثلاجة كهربائية، أو مبرد تحت الصفر (- 20 °م) Deep freezer أو تخزن فى مجفف Desecrator أو فى غرفة مبردة تحتوى على أرفف لتخزين البيئات الجاهزة أو الـ Stocks . ولتجهيز تلك البيئات يجب استعمال موازين دقيقة حساسة لوزن مكونات البيئة الدقيقة كذلك يجب استعمال مقلب مغتاطيسى Magnetic hot plate stirrer لتقليب الأملاح والفيتامينات والهرمونات أثناء إذابتها .




http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/env.gif
http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/env2.gif
http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/env3.gif

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:04 AM
-قياس الرقم الهيدروجينى Determination of PH

كثير من العمليات الفسيولوجية تؤدى إلى تغير الرقم الهيدروجينى داخل الخلية وهذا التغير يؤثر فى تلك العمليات ولهذا فإن فهم الرقم الهيدروجينى PH يعتبر مهماً فى مجال زراعة الأنسجة ومن المهم أن يكون واضحاً أن ذلك التغير يجب أن يكون طفيفاً لكى لا تتأثر الخلايا و تفقد مقدرتها على الاستمرار فى فعاليتها ونشاطها.


والرقم الهيدروجينى هو مقياس لتركيز أيون الهيدروجين فى محلول ما يعرف بأنه اللوغاريتم السالب للأساس عشرة لفاعلية ذلك الأيون –Log 10 والرقم الهيدروجينى لسيتوبلازم الخلايا يختلف من 6:6.5 أما عن الفجوات العصارية فهى ذات رقم هيدروجينى حمضى إذ يبلغ 1.5 : 2 فى أوراق البيجونيا فى حين أنه 5.5 فى أوراق الليمون. ولكن الرقم الهيدروجينى للخلايا البرنشيمية فى الجذور والسيقان 5.5 : 6 ويرجع ميل تركيزات أيون الأيدروجين ناحية الحموضة داخل الخلايا النباتية إلى احتوائها على الأحماض العضوية Organic acids والتى تختلف فى درجة تفككها وكذلك فى احتوائها على المجموعات الكربوكسيلية التى تتفكك , فحمض الماليك مثلاً يحتوى على مجموعتين بينما حمض الستريك يحتوى على ثلاث مجموعات . فالرقم الأيدورجينى للسيتوبلازم كما نرى غير منخفض ويرجع ذلك إلى إحتواء الخلية على القواعد والمجموعات التى يمكن أن تتحد بالبروتينات المتفككة من تلك الأحماض مثل البيكربونات والفوسفات ومجموعات أمينية ولو أن الأخير لا يعد قاعدة قوية لذا فإن المجموعات السابقة تعمل على الإتحاد بالبروتينات المتفككة من الأحماض العضوية وبالتالى فهى تعمل كنواتج Buffers فسيولوجية لزيادة الرقم الهيدروجينى فى سيتوبلازم الخلية وبهذه الميكانيكية تعمل الخلايا على المحافظة على رقم هيدروجينى ثابت .


http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/meter2.gif


لذا يجب ضبط PH البيئة الغذايئة عند درجة تركيز هيدروجينى مناسب يلائم امتصاص تلك الخلايا للمواد الغذائية واستمرار نموها ونشاطها على تلك البيئة حيث أن زراعة النسيج على بيئة ذات PH منخفض فى أى من الجهتين فإن ذلك يؤدى إلى انخفاض درجة تشبع الأنزيمات بالمواد المتفاعلة Substrate وقد تفقد الأنزيمات نشاطها نتيجة تغير حالة التأين للمراكز النشطة بالأنزيمات وبالطبع فإن فقد الأنزيمات لنشاطها تفقد الخلايا نشاطها أيضاً . لذلك يجب استخدام جهاز جيد لضبط الرقم الهيدروجينى ومعايرته من آن لآخر باستخدام Buffer solution حديث التحضير ، ويعتمد جهاز PH meter على اختلاف فرق الجهد الكهربى بين المناطق المختلفة فى نشاط أيوناتها المشحونة حيث يغمر إلكترود الجهاز فى محلول البيئة لقياس PH ويعدل ذلك الرقم بإضافة عدة نقط من حامض أو قلوى معلوم العيارية .


5-التعقيم Sterilization
تعقم عادة الأدوات والزجاجيات التى تستخدم فى الزراعة مثل الأطباق البترى والكئوس والماصات ورقائق الألمونيوم والشاش..إلخ وتعقم الزجاجيات داخل الفرن على درجة حرارة 160 – 180 م لمدة 1.5 : 2 ساعة مع تغليفها بورق الألومنيوم ثم بعد التعقيم تنقل إلى غرفة أو كابينة الزراعة ، أما البيئات الغذائية فعادة تعقم داخل الأتوكلاف على درجة 121 م لمدة 15 دقيقة و الأتوكلاف جهاز للتعقيم يحتوى على إناء من الصلب يتحمل الضغط وتعتمد فكرة التعقيم وعليه ترتفع معها درجة غليان المحلول وبذلك لا تغلى المحاليل داخل الأتوكلاف حيث يصاحب ارتفاع الضغط ارتفاع مصاحب فى درجة الغليان ودرجة الحرارة 121 م عند 1.2 ضغط جوى وهى درجة كافية لقتل الكائنات الدقيقة، ويترك الجهاز دون فتح البخار حتى ينخفض الضغط داخله ليتعادل مع الضغط الجوى وإلا تطايرت أغطية الأنابيب وأدت درجة الحرارة العالية إلى غليان محاليل البيئة .


http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/ster.gif


تعقم بعض المواد التى يمكن أن تتأثر بحرارة الأتوكلاف مثل حمض الجبرلين والأنزيمات المستخدمة فى تحليل جدر الخلايا عند زراعة البروتوبلاست باستخدام فلتر خاص لا يسمح بمرور الكائنات الدقيقة وتستقبل المادة المعقمة داخل أنابيب معقمة أيضاً ثم يتم حقن كل أنبوبة بقدر مناسب من المادة المعقمة بالترشيح للبيئة الغذائية السابقة التعقيم بالأتوكلاف.

ويجب أن تكون البيئة غير صلبة وعليه أن يتوفر بمعمل زراعة الأنسجة حمامات مائية أو ميكروويف لصهر البيئة حتى يمكن خلط المواد ( مثل الجبرلين ) المعقم بالترشيح بباقى البيئة التى يجب ألا يزيد درجة حرارتها عن 40 درجة مئوية . ولإتمام عمليات التعقيم بسهولة ويسر يجب توفر سلات لنقل الأنابيب والدوارق داخل الأتوكلاف . كذلك يجب توفر صوانى وحوامل أنابيب ووسائل تعليم الزجاجيات حتى لا تختلط وتفقد هويتها بعد الخروج من الأوتوكلاف .


http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/filter.gif



6-الزراعة والنقل Culture incubation and transfer
عزل وزراعة الخلايا أو الأنسجة يجب كما سبق الإشارة إليه أن يتم فى جو غاية فى النظافة ويمكن أن يتم ذلك باستخدام كابينة Laminar air flow مزودة بفلتر يمرر خلاله هواء مضغوط يؤدى إلى خروج الهواء لحيز الكابينة وهو خالى من الكائنات الدقيقة التى تتواجد فى الهواء العادى ، وبالطبع يجب أن توضع كابينة العزل فى مكان نظيف ويفضل أن تكون حجرة ذات أبواب مزدوجة Double sliding doors وذلك لتقليل الأتربة Atmospheric duct فى جو حجرة العزل .

وعادة للمحافظة على فلتر كابينة العزل ينظف من آن إلى آخر وذلك بشفطه ميكانيكياً أو غسله، وتزود كابينة التعقيم بمصدر للإضاءة وكذلك مصدر للكهرباء لتوصيل الميكروسكوب عند الرغبة فى استخدامه ولزيادة الحيطة وخوفاً من التلوث يستخدم القائم بالعمل قفازات بلاستيكية كما يمكن استخدام ملابس معقمة خاصة بالعمل، وترجع أهمية القفازات إلى حماية البشرة من الجفاف الناتج من استخدام الكحول فى تعقيم الأيدى قبل إجراء الزراعة، كذلك تستخدم الملابس المعقمة لتقليل التلوث من الملابس الشخصية للقائم بالعمل.

وتستخدم أدوات العزل وفصل الأنسجة Surgical instruments مثل الملاقط Forceps ، ملعقة الصيدلى Spatula ، الإبر Needles ، المشرط Scalpel ، المقص Scissor فى فصل Explant ونقلها على سطح البيئة الغذائية وتعقم تلك الأدوات باستخدام Sterilizer الخاص بذلك أو بغمس الأدوات فى كحول وحرقها على النار باستخدام موقد كحولى Spirit lamp أو موقد بنزين Bunsen burner كذلك يجب وضع رشاشة كحول Spray bottle of alcohol لرش الكحول على أسطح كابينة العزل لتعقيم اسطحها فى بداية العمل ويترك الجهاز لمدة نصف ساعة للتأكد من نظافتها قبل استعمالها .


http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/separate.gif



7-التحضين Culture incubation
تحضن الأنابيب أو الدوارق داخل حجرة ذات أرفف أو داخل حضانة متسعة ومزودة بالإضاءة والحجرة تحتوى على مكيف للهواء للتحكم فى درجة الحرارة وتزود حجرة التحضين بقاطع للتيار الكهربى Cut out device ومنبه Alarm bell يعمل إذا ارتفعت درجة الحرارة أكثر من المعدل المطلوب بدرجتين إلى ثلاث درجات مئوية وتزود حجرة التحضين بهزاز Shaker لتوفير التهوية للبيئات السائلة كما تزود حجرة التحضين بميقاتى Timer switch لتحديد زمن الإضاءة والإظلام وعادة ما تتعرض الزراعات لمدة 16 ساعة إضاءة يومياً وثمان ساعات إظلام أما بالنسبة للرطوبة فيجب ألا تزيد عن 70 % وذلك لأن زيادتها تزيد من فرص التلوث ونقصها أيضاً غير ملائم نظراً لإسراع البيئة الغذائية Drying out of culture medium .

8-عملية النقل للجو الخارجى In vivo transfer
تنقل النباتات الناتجة من زراعة الأنسجة إلى الجو الخارجى تدريجياً بدأ بالصوبة الزجاجية Glasshouse أو Screen house أو داخل أحواض خاصة Horticultural propagator ثم إلى الحقل . والتدرج فى الانتقال هام حيث أنه ينقل نباتات نامية فى جو مائى أوشبه مائى إلى جو عادى لذلك يجب أن تعامل النباتات معاملات التقسية التى من شأنها أن تتيح للنباتات مقدرة على تحمل الظروف خارج الأنبوبة وذلك بتعريض النباتات لشدة إضاءة تصل إلى 10000 Lux مع فتح الأنابيب عدة مرات قبل نقلها ثم تنقل النباتات مباشرة إلى أصص بلاستيك أو Jiffy 7 مملوء بمخلوط زراعى مناسب معقم Sterilized compost وتنقل النباتات إلى الصوبة تحت رى رزازى Mist أو داخل الأحواض ذات الأرضية الشفافة أو توضع الأصص داخل أكياس من البلاستيك ثم تدريجياً تقلل الرطوبة إلى الجو العادى ، أما عند تصدير النباتات Plantlets إلى الخارج عادة يستخدم تغليف خاص Polystyrene boxes وتفحص لخلوها من الأمراض قبل تصديرها .

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:05 AM
ملخص لاحتياجات (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11327/)معمل (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11327/)زراعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11327/)
الأنسجة


1- عام General
- تجهيزات كهربائية ومولد كهربائى للطوارئ -
GeneratorElectric supply with emergency
- مصدر مائى - Main water source
- مصدر للغاز - Gas supply
- مكيف هواء - Air condition
- مناضد - Benching
- طفاية
حريق - Fire Extinguisher


2- الغسيل Washing up
- حوض مزدوج كبير الحجم - Double sink large size
- مصدر مائى ساخن وبارد - Hot and cold water supply
- حوامل للتجفيف - Draining rack
- زجاجات للتنظيف - Bottle brushe
- كابينة أو فرن للتجفيف - Hot air drying cabinet or oven



http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/heater.gif




- صندوق للنفايات - Waste bins
- بالطو وقفازات - Waterproof apron and gloves
- جمدانة مياه - Glass / plastic covered containers for distilled water
- حامل للمناشف - Towel holder
- منظفات وصابون - Detergent , chemical decontaminant and soap
- ماكينة غسيل أتوماتيكية - Glassware washing machine
- جهاز تقطير مياه بالفصل الكهربى - Water de-ionizer



3- إعداد البيئة وتخزينها media preparation and storage

- أرفف للكيماويات - Shelves for chemicals
- دولاب للكيماويات - Chemical capboard
- ثلاجة - Refrigerator
- مبرد تحت الصفر - Deep Freezer
- مجفف - Desiccator
- ميزان حساسيته - 0.1 مليجرامBalance accurate to 0.1 mg





http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/scale.gif







- قوارب للوزن - Weighing balance boat






http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/kwareb.gif








- معلقة الصيدلى - Spatula
- مقلب مغناطيسى - Magnetic stirrer / hot plate
- جهاز تقدير أيون الأيدروجين - PH meter with buffers and adjusting solution








http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/meter2.gif







- ترمومتر - Thermometer
- دوارق مخروطية - Conical flask 100, 250, 500, 1000 ml
-دوارق مخروطية - Volumetric flask 100
- كاسات - Beckers 1000 – 2000 ml
- أقماع - Funnels
- مضخة ماء - Water jet pump
- ماصة مدرجة - Graduated pipettes 1, 2, 5, 10 ml
- ماصة أتوماتيكية - Automatic pipettes
- سرنجة- Syringe
- زجاجات الزراعة - Culture vessels , tubes, flasks
bottles






http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/awani.gif









- سبت سلك - Wire baskets for carrying bottles and tube

- أتوكلاف - Autoclave

- صوانى - Trays

- ورق ألومنيوم - Aluminum foil

- قلم للكتابة على الزجاج ضد الماء - Waterproof makers

- حمام مائى - Water bath

- جهاز طرد مركزى - Low speed centrifuge

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:05 AM
أدوات عزل وزراعة الأنسجة Culture incubation and transfer instrument

- ماصة أتوماتيكية Automatic pipettes
- سرنجة Syringes : 1 ml, 10 ml, 20 ml
- زجاجات الزراعة Culture vessels , tubes, flasks bottles
- زجاجات ذات قمة لوبية Glass screw tap battles ; 250 , 500 , 1 ml
- قنينة بلاستيك Plastic vials : 10 ml , 20 ml
- سبت بلاستيك Wire baskets for carrying bottles and tube
- أتوكلاف Autoclave
- صوانى Trays
- ورق ألومنيوم Aluminum foil
- قلم للكتابة على الزجاج ضد الماء Waterproof makers
- فرن حرارى للتعقيم Heat sterilizing oven
-حمام مائى Water bath
- جهاز طرد مركزى Low speed centrifuge
- حلة ضغط Pressure Cooke


5 - أدوات عزل وزراعة الأنسجة Culture incubation and transfer instrument

- كابينة عزل Laminar air flow cabinet

- مشرطScalpel


http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/5b.gif

http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/scal.gif



- معلقة الصيدلى Spatula
-الإبر Needles
- مقص Scissors
- موقد كحولى Spirit lamp
- ميكروسكوب بمصدر ضوئىDissecting microscope
- قفازات Gloves


- بارافيلمPara film



http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/micro.gif

http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/benokliz.gif





5- التحضين Incubation

- حجرة أو كابينة متحكم فيها درجة الحرارة والرطوبة Room cabinet with temperature and humidity control
- أرفف مضاءة Shelving with light


- حوامل أنابيب Test tube racks

http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/pipe.gif




- هزاز Shaker

http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/vibr.gif




- النقل الجوى للخارج In vitro transfer
- أصص Plant pots
- صوانى Trays
- علامات Plane labels
- حوض زراعة Horticultural propagator
- كاسات أو أكياس بلاستيك Beakers or plastic bags
- وسط للزراعة Compost
- سماد سائل Liquid fertilized
- جهاز الرى الرزازىMist propagator or high humidity chamber

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:06 AM
استخدام زراعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)كوسيلة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)سريعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)للتكاثر

للحصول على السلالة الخضرية يتبع فى تكاثرها عدة وسائل منها زراعة الأبصال والدرنات والكورمات والمدادات والريزومات وتكوين الجذور العرضية على العقل والتطعيم و يضاف إلى ذلك التقنية الجديد المعروفة بزراعة الخلايا والأنسجة والأعضاء.

أهم الاختلافات بين وسيلة زراعة الأنسجة والوسائل التقليدية للتكاثر (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)ما يلى :

1-صغر حجم الجزء المستعمل فى التكاثر Propagules .
2-تتم الزراعة فى وسط مائى " على بيئة سائلة أو شبه سائلة ".
3-تتم الزراعة تحت ظروف معقمة وتحت ظروف بيئية " حرارة وضوء " مناسبة.
4-استخدام تلك الوسيلة للتكاثر ويمكن إنتاج أعداد كبيرة إذا ما قورنت بالطرق التقليدية.
5-خلو النباتات الناتجة بذلك التكنيك من الأمراض Pathogen free plants .
6-سهولة الاحتفاظ بتلك النباتات وتخزينها لحين الحاجة إليها.

وهناك فائدة نجنيها من استخدام (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)هذا التكنيك فى التكاثر وهو انخفاض تكلفة الإنتاج مقارنة بالطرق التقليدية والتى تتميز بارتفاع أثمان النباتات الناتجة كما فى نباتات الزينة وبعض أنواع الفاكهة الممتازة فى صفاتها والمرغوبة تجارياً أو التى يصعب تكاثرها بالطرق التقليدية أو التى إنتاجها قليل من الفسائل مثلاً كالنخيل والذى يبلغ ثمن الفسيلة فى بعض أنواعه من 50 – 100 جنيه فضلاً على إمكانية إنتاج تلك النباتات دون ارتباط بموسم زراعى كما يحدث عند التكاثر بالوسائل التقليدية. كذلك خفض تكلفة الإنتاج للنباتات تساعد أيضاً مربى النبات على إنتاج نباتاته المحسنة, فمثلاً وجد أن نبات البطيخ ثلاثى المجموعة الكروموسومية يتكلف 1.6 إلى 2.5 دولار تنخفض تلك التكلفة للعشر باستخدام تلك التقنية فى تكاثر نبات البطيخ الثلاثى.

وللوصول لهذه الغاية هناك عدة مسالك وطرق للحصول نباتات السلالة الخضرية Alternative method of colnal multiplication

أ –Callus production (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)pathway (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)
فيها تزرع Explant للحصول على الكلس خلال Stage Іأما Stage ІІ حينما يكون الغرض هو الزيادة العددية للمادة المتكاثرة فيتم نقل أجزاء من الكلس على نفس البيئة " وحوالى 0.5 جرام من الكلس " لاستمرار نموها وزيادة Propagules ثم تنقل على بيئة جديدة يتغير فيها مكونات البيئة من حيث المستوى الهرمونى والفيتامينات .





http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/1h.gif










وقد تتغير الاحتياجات البيئية لتكوين النموات الخضرية العرضية Adventitious shoot على الكلس خلال Stage Ш يعزل كل Shoot منفرد على بيئة تساعدة على تخلق الجذور عليه خلال مع التقسية لإمكان نقلها للتربة .



هذه الطريقة بالرغم من سهولتها وإمكان إنتاج أعداد وفيرة من النباتات منها فإنها فى بعض الحالات لا تنتج النباتات المطلوبة نظراً لتغير صفات النباتات الناتجة لحدوث تضاعف العدد الكروموسومى عند انقسام بعض الخلايا. لذلك وجد أن الأنسجة المتشابهة تشريحياً فى محتواها من الخلايا تكون كلس متجانس متشابه أما الأجزاء النباتية التى تحتوى على أنواع عديدة من الأنسجة سوف تكون كلس مختلط ومتنوع ومتضاعف ينتج عن نباتات تختلف وراثياً عن الآباء. وعليه فإن اختيار الأجزاء النباتية يجب أن يتم بكفاءة من حيث تركيبها حتى يمكن إنتاج كلس متجانس مطلوب.


ب -Axillary brunching (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)pathway




دون المرور بمرحلة تكوين الكلس كما فى الطريقة السابقة يتم زراعة المنفصل النباتى وفى الغالب القمة النامية أو البرعم الجانبى لينمو مباشراً إلى أفرع خضرية وذلك فى Stage І أما Stage ІІ ولزيادة Propagules ينقل الـ ShootAxillaryالمتكون من المرحلة الاولى إلى بيئة تساعد على تكون النموات الجانبية على ذلك النمو الخضرى axillary (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)branch بعداد مضاعفة ثم تعزل كل Shoot على حدى وتنقل مرة أخرى على نفس البيئة فتتكون عليها عدد آخر من Axillary shoot ، وذلك خلال Stage ІІ ثم فى Stage Ш ينقل كل Shoot على بيئة تخليق الجذور .







http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/2h.gif







ج –Somatic embryogenesis (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)pathway




يتم زراعة Explant على بيئة مناسبة تدفع المنفصل النباتى الى تكوين الأجنة العرضية مباشرا أو يتكون callus (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11338/)خلال Stage І ثم تنقل على بيئة غذائية لإنماء الأجنة خلال Stage ІІ ,Ш أو تتكون الأجنة من الكلس .


وسوف نتحدث عن كل طريقة بشئ من التفصيل.

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:09 AM
استخدام زراعة الأنسجة كوسيلة سريعة للتكاثر

للحصول على السلالة الخضرية يتبع فى تكاثرها عدة وسائل منها زراعة الأبصال والدرنات والكورمات والمدادات والريزومات وتكوين الجذور العرضية على العقل والتطعيم و يضاف إلى ذلك التقنية الجديد المعروفة بزراعة الخلايا والأنسجة والأعضاء.

أهم الاختلافات بين وسيلة زراعة الأنسجة والوسائل التقليدية للتكاثر ما يلى :

1-صغر حجم الجزء المستعمل فى التكاثر Propagules .
2-تتم الزراعة فى وسط مائى " على بيئة سائلة أو شبه سائلة ".
3-تتم الزراعة تحت ظروف معقمة وتحت ظروف بيئية " حرارة وضوء " مناسبة.
4-استخدام تلك الوسيلة للتكاثر ويمكن إنتاج أعداد كبيرة إذا ما قورنت بالطرق التقليدية.
5-خلو النباتات الناتجة بذلك التكنيك من الأمراض Pathogen free plants .
6-سهولة الاحتفاظ بتلك النباتات وتخزينها لحين الحاجة إليها.

وهناك فائدة نجنيها من استخدام هذا التكنيك فى التكاثر وهو انخفاض تكلفة الإنتاج مقارنة بالطرق التقليدية والتى تتميز بارتفاع أثمان النباتات الناتجة كما فى نباتات الزينة وبعض أنواع الفاكهة الممتازة فى صفاتها والمرغوبة تجارياً أو التى يصعب تكاثرها بالطرق التقليدية أو التى إنتاجها قليل من الفسائل مثلاً كالنخيل والذى يبلغ ثمن الفسيلة فى بعض أنواعه من 50 – 100 جنيه فضلاً على إمكانية إنتاج تلك النباتات دون ارتباط بموسم زراعى كما يحدث عند التكاثر بالوسائل التقليدية. كذلك خفض تكلفة الإنتاج للنباتات تساعد أيضاً مربى النبات على إنتاج نباتاته المحسنة, فمثلاً وجد أن نبات البطيخ ثلاثى المجموعة الكروموسومية يتكلف 1.6 إلى 2.5 دولار تنخفض تلك التكلفة للعشر باستخدام تلك التقنية فى تكاثر نبات البطيخ الثلاثى.

وللوصول لهذه الغاية هناك عدة مسالك وطرق للحصول نباتات السلالة الخضرية Alternative method of colnal multiplication

أ –Callus production pathway
فيها تزرع Explant للحصول على الكلس خلال Stage Іأما Stage ІІ حينما يكون الغرض هو الزيادة العددية للمادة المتكاثرة فيتم نقل أجزاء من الكلس على نفس البيئة " وحوالى 0.5 جرام من الكلس " لاستمرار نموها وزيادة Propagules ثم تنقل على بيئة جديدة يتغير فيها مكونات البيئة من حيث المستوى الهرمونى والفيتامينات .




http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/1h.gif








وقد تتغير الاحتياجات البيئية لتكوين النموات الخضرية العرضية Adventitious shoot على الكلس خلال Stage Ш يعزل كل Shoot منفرد على بيئة تساعدة على تخلق الجذور عليه خلال مع التقسية لإمكان نقلها للتربة .

هذه الطريقة بالرغم من سهولتها وإمكان إنتاج أعداد وفيرة من النباتات منها فإنها فى بعض الحالات لا تنتج النباتات المطلوبة نظراً لتغير صفات النباتات الناتجة لحدوث تضاعف العدد الكروموسومى عند انقسام بعض الخلايا. لذلك وجد أن الأنسجة المتشابهة تشريحياً فى محتواها من الخلايا تكون كلس متجانس متشابه أما الأجزاء النباتية التى تحتوى على أنواع عديدة من الأنسجة سوف تكون كلس مختلط ومتنوع ومتضاعف ينتج عن نباتات تختلف وراثياً عن الآباء. وعليه فإن اختيار الأجزاء النباتية يجب أن يتم بكفاءة من حيث تركيبها حتى يمكن إنتاج كلس متجانس مطلوب.
ب -Axillary brunching pathway


دون المرور بمرحلة تكوين الكلس كما فى الطريقة السابقة يتم زراعة المنفصل النباتى وفى الغالب القمة النامية أو البرعم الجانبى لينمو مباشراً إلى أفرع خضرية وذلك فى Stage І أما Stage ІІ ولزيادة Propagules ينقل الـ ShootAxillaryالمتكون من المرحلة الاولى إلى بيئة تساعد على تكون النموات الجانبية على ذلك النمو الخضرى axillary branch بعداد مضاعفة ثم تعزل كل Shoot على حدى وتنقل مرة أخرى على نفس البيئة فتتكون عليها عدد آخر من Axillary shoot ، وذلك خلال Stage ІІ ثم فى Stage Ш ينقل كل Shoot على بيئة تخليق الجذور .





http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/2h.gif





ج –Somatic embryogenesis pathway


يتم زراعة Explant على بيئة مناسبة تدفع المنفصل النباتى الى تكوين الأجنة العرضية مباشرا أو يتكون callus خلال Stage І ثم تنقل على بيئة غذائية لإنماء الأجنة خلال Stage ІІ ,Ш أو تتكون الأجنة من الكلس .
وسوف نتحدث عن كل طريقة بشئ من التفصيل.

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:10 AM
يتكون الكلس عند زراعة Explant على بيئة غنية بالأكسين (1 – 10 مليجرام / لتر) ويفضل استخدام 2,4-D لدورة الواضح فى إنتاج الكلس مع مستوى منخفض من السيتوكينين بتركيز من 0 – 10 مليجرام / لتر ويفضل استخدام BA
ويمكن إضافة الأكسين منفرداً خاصة إذا استعمل فى صورة 2,4-D ولكن نظراً لدور الأكسينات فى تثبيط تكون النموات الخضرية Shoot formation لذلك ينقل الكلس بعد تكونه على بيئة محتوية على مصدر أكسينى آخر غير2,4-D مثل استخدام NAA أو IAA .
http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/33h.gif

لتكوين النموات الخضرية العرضية Adventitious shoot تنقل خلال Stage ІІ على مستويات متكافئة من الأكسين والسيتوكينين 2 – 3 مليجرام / لتر لكل منهما وفى بعض الحالات تنقل على بيئة عالية من السيتوكينين ومنخفضة من الأكسين .
خلال Stage ІІ يمكن تشجيع تخليق النموات الخضرية بإضافة Adenine sulphate بتركيز 150 مليجرام / لتر ، وكذلك إضافة Casein hydralysate بتركيز 500 – 1000 مليجرام / لتر وأيضاً من المفيد إضافة Tyrosine بتركيز 1 – 10 مليجرام / لتر فهى تساعد على تخليق النموات الخضرية Shoot proliferation .
http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/3h.gif

يلاحظ أثناء تخليق النموات العرضية أنة قد يصاحبها تكون كلس , هذا يعنى أن مستوى الهرمون خاصة الأوكسين منه عالى أكثر من اللازم Level are too high – ولو أن ذلك ليس بالقاعدة العامة ففى كثير من النباتات يتكون الكلس نتيجة حساسية تلك النباتات للجروح فيتكون الكلس عند السطوح المجروحة



خلال المرحلة الثالثة Stage Ш تنقل Shoot المتكون من المرحلة السابقة على بيئة جديدة لتكوين الجذور العرضية تلك البيئة تمتاز بمستواها المنخفض من الأملاح ( 1/4 ، 1/3 تركيز الأملاح فى البيئة المستخدمة خلال Stage І , Stage ІІ ) مع إضافة الأكسين فقط.

يستعمل IAA بتركيزات فى حدود 10 مليجرام / لتر وكذلك NAA , IBA بتركيزات فى حدود 0.1 – 3 مليجرام / لتر.
ترفع الإضاءة من 1000 – 10000 Lux مع إضافة الفحم النشط فى Ш Stage كذلك وجد من المفيد أيضاً إضافة بعض الفينولات مثل Caffice acid , phloroglucinal فهى تساعد على التخليق الجيد للجذور .
ب – Axillary shoots pathway


تؤخذ القمم النامية من بادرات النباتات بطول 1 – 5 مم أو قطاعات من الساق أو الجذر كمنفصل نباتى Explant وتزرع على بيئة غذائية ذات مستوى منخفض من السيتوكينين 0.05 – 0.5 مليجرام / لتر BA ومنخفض من الأكسين 0.01 – 0.1 مليجرام / لتر IBA أو تزرع Explant على بيئة ذات مستوى هرمونى متوسط من كل من الأكسين والسيتوكينين ( 2 مليجرام / لتر NAA + مليجرام / لتر Kinetin ) .

http://www.alhadeeqa.com/albumvb/nursary/4h.gif

تنمو Explant إلى Shoot proliferated يفصل كل منها وتزرع على بيئة جديدة لزيادة Propagules فتتكون النموات الجانبية Axillary shoots وتكون البيئة بنفس التركيزات السابقة أو مستوى أعلى من السيتوكينين بالنسبة للأكسين 0 – 3 مليجرام IAA وفى تلك المرحلة يفضل استعمال N, isopentenyl adenine ) 2 ip ) كمصدر للسيتوكينين . ولكن ذلك ليس بقاعدة عامة فالتركيزات والهرمونات المستخدمة تختلف باختلاف النباتات كما هو مبين بالجدول (10) وقد أشار Hussey & Hepher 1978 إلى وجود استثناء على نبات Brassica mapus حيث أمكن تخليق Axillary shoot على بيئة ذات مستوى من السيتوكينين فقط بدون إضافة أكسين ويضاف السيتوكينين فى صورة BA بتركيزات تتراوح بين 0.25 – 1 مليجرام / لتر.





من الدراسات الهامة فى هذا المجال وجد أن زيادة السكر يقلل من عدد النموات الجانبية المتكونة كما وجد Davies 1980 أن أنسب تركيز للسكر كان 4 % .


وفى دراسة لنفس الباحث السابق ذكرة على سبع أصناف من الورد وجد أن الإضاءة العالية 1000 Lux خلال Stage ІІ أدت إلى إعطاء أوراق كبيرة فى الحجم وكان تخليق Axillary shoot فقيراً بالمقارنة لشدة الإضاءة المنخفضة 400 Lux عند اسنخدام نفس التركيزات من الهرمونات فى خلال Stage Ш




تنقل Shoot كلا على حدى على بيئة جديدة لتكوين الجذور وهى بيئة تحتوى على الأكسين مثل NAA بتركيزات تتراوح بين 0.25 – 0.5 مليجرام / لتر مع زيادة شدة الإضاءة من 1000 – 10000 Lux .

جدول (10) يبين تركيز الهرمونات المستخدمة فى كل مرحلة من مراحل التكاثر المختلفة Stage Ш

Stage ІІ

Stage І

Plant

IAA 11.5 Mm

Kg.3Mm+IAA 0.28uM

Ls medium + k 4.4um + IAA .28 uM

البطيخ
Water melon

NAA 0.1 ppm

No changes

Ms + k 2ppm + NAA 0.04 + GA 0.1 ppm

الورد
Rose

NAA0.5 ppm or NAA0.25+IBA0.25ppm

Ba 0.25-0.4 or NAA0.1+ME500ppm

Ms + k 0.25 + NAA 2 - 5 ppm

الموالح
Citrus

NAA 0.5 ppm

Ms+IAA1.0+2ip10+Admin SO4 26.84 thiamine 0.4

MS + IAA 1.0 + BA 1.0 ppm

البجونيا
Begonia

IAA10 ppm + Tyrasine124 -30

Ms + IAA 0.5+k10+ Admin SO4 71-59+ Tyrasine124-30

MS + IAA 0.5 + k 1.0

الجربيرا Gerbera

NAA or IBA2ppm + 0-25 3% charcoal

Ms + BA 5 ppm or No change

Ms + BA3 or IAA2 + k 2.0 ppm

الموز
Banana

IBA 1 ppm

IBA+ BAI or IAA2.5 ppm + k 0.1 ppm

IBA + BA 0.1 or IAA 1.0 ppm

الفراولة Strawberries

بدون هرمون + 1000Lx

0.3IAA + k 1.0 ppm

0.1 IAA + k 0.1 ppm

القرنفل Carnation

IBA 0.5 ppm

No change

IAA 0.3 + 2ip 30 ppm

الفيكس
Ficus

NAA 0.1 ppm

No change + BA 8 ppm

0.0 NAA + BA 2 ppm

الورد
Rose

IBA or NAA, NOA 10uM + phleroglucnel

No change

BA 5-10 um

التفاح
Apple

AA0.2 or NAA0.2 + 2ip 0-0.1 ppm

2ip 0.5 ppm

2ip 0.5 ppm + NAA 0.1 ppm

الثوم
Garlic

No change

NAA 0.1 + k 2 ppm

NAA 2 + k 5.0 ppm
NAA 2 + k 1.0 ppm

الطماطم
Tomato

-

-

NAA0.01 or 1 ppm + k 5-10 ppm

البطاطس
Potato

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:10 AM
الظروف البيئية للمزرعة The culture environment

العوامل البيئية اللازم توافرها عند زراعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11337/)الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11337/)هى رطوبة مناسبة للمحافظة على الأنسجة من الجفاف ودرجة حرارة مناسبة واحتياجات ضوئية مناسبة.

الاحتياجات الضوئية Light requirement
يجب النظر للاحتياجات الضوئية لمزرعة الأنسجة من حيث طول القترة الضوئية Day length وشدة الإضاءة Light intensity باهتمام كبير والغرض من العناية بالإضاءة فى الواقع ليس لتشجيع البناء الضوئى Photosynthesis نظراً لاحتواء البيئة الغذائية على السكريات التى تحتاجها الأنسجة عند تكاثرها ونموها ولكن لاحتياج الأنسجة للضوء لمساعدتها على نشأة وتخليق الأعضاء Initiation فالضوء ينظم التميز المورفولوجى للنبات Morphogenetic processes فهو يساعد على تكوين مبادئ الجذور والسوق وتخليق الأجنة النيوسيلة والأجنة الخضرية العرضية من نسيج الكلس وعليه فإن صعوبة تكشف الأعضاء فى بعض الزراعات الغير ناجحة يرجع إلى عدم تعرضها لشدة الإضاءة المناسبة وقد لوحظ أن زراعة الأنسجة يلزمها التدرج فى شدة الإضاءة من 300 – 3000 Lux وفى مرحلة تكوين بديات الجذوروقد اقترح Nobel & Naylar 1968 بعد دراسته على كثيرمن النباتات مثل الأسبرجس والطرطوفة أن الدرجة المثلى من كثافة الضوء تكون عادة 1000 Lux فى Stage І,П والدرجة المثلى فى Stage Ш تكون ما بين 3000 – 10000 Lux باستعمال لمبات الفلورسنت البيضاء وتعريض الزراعات لمدة إضاءة قدرها 16 ساعة يومياً.

طول فترة الاضاءة The daily light period
طول النهار وهو عامل هام ومؤثر فى تكوين الأنسجة والأعضاء فمثلاً وجد Nobel & Naylar 1968 أن أقصى تخليق للجذور فى نبات الطرطوفة Helianthus tuberosus يكون عند كثافة ضوئية قدرها 5000 Lux باستعمال ضوء أبيض لمدة 12 ساعة يومياً . فى حين ذكر Margara 1969 أن الحد الأدنى لشدة الإضاءة اللازمة لتعريض الأنسجة لكى تتمكن من تخليق Shoots فى القرنبيط كانت 400 Lux عند تعريض الأنسجة لإضاءة 9 ساعات فقط . وقد لاحظ Allewldt & Radler 1961 أن نشأة الجذور العرضية لا تتكون على شرائح سيقان " نبات قصير النهار لإحدى أصناف العنب " إلا أن عرضت إلى ظروف النهار القصير فقط. كما وجد Legrand 1971 عند زراعته لشرائح من نبات Cichorium أن أقصى معدل لتكشف الأعضاء ينتج عند تعريض الأنسجة إلى ثلاثة أيام متصلة للإظلام متبوعة بـ 37 يوم من الإضاءة كما لاحظ أن طول الفترة الضوئية تؤثر على التكشف وتكوين الأعضاء على الأنسجة.

نوع الضوء Light quality
وجد Weis & Jaffe 1969 أن تكشف النموات الخضرية يتأثر بمنطقة الضوء الأزرق ولا تتأثر بالضوء الأحمر (طول موجى 660 mm ) فى حين وجد Seibert 1973 أن Purple light بطول موجى 419 mm إنه ينشط تكشف النموات الخضرية أما تخليق الجذور فتتأثر بالضوء الأحمر وفى تجربة متميزة على فطر Pohlia nutans وجد Mitra & prabha 1965 أن تكون البراعم الخضرية تتطلب توازن فى التعرض لكل من الضوء الأحمر والأزرق فعند تعريض الأنسجة لـخليط من ساعات الأضاءة Combination مثل 11 ساعة من الضوء الأحمر مع 6 ساعات ضوء أزرق أعطت أفضل النتائج مما لو عرض كل منهما مفردة وكانت أقل النتائج المتحصل عليها عند التعرض للضوء الأحمر فقط .
مما سبق نتبين أن تنظيم عملية التكشف ينظمها ظاهرة Photomorphogenic phenomena والتى يلعب الفيتوكروم فيها دوراً رئيسياً .

الاحتياجات الحرارية لبيئة زراعة الأنسجة Heat requirements
فى معظم الأحيان تكون درجة 27 °م هى أنسب درجة لنمو زراعة الأنسجة إلا فى النباتات الاستوائية Tropical plants ونباتات المناطق الحارة يكون تكشف الأعضاء بصورة أفضل فى درجات حرارة تتراوح ما بين 27 – 35 °م وفى تجربة للعالم Skoog وجد أن أنسب درجة للبراعم الخضرية على نبات الدخان كانت 18 °م وكان الدرجة القصوى 33 °م والحد الأدنى هى درجة 12 °م وحديثاً وجد Kefford & Caso 1972 عند دراسة على نبات Chondrilla juncea بزراعة الجذور أمكن الحصول على أفضل نتائج من Adventitious shoot formation عندما عرضت أنسجة الجذور لحرارة من 21 – 27 م° نهاراً و 16 – 22 م° ليلاً وكان ذلك أفضل من تعرض الزراعات إلى 25 °م مستمرة . كذلك فى دراسة على قطاعات من درنات Helianthus tuberosus اكتشف Gautheret 1969 أن التجدير يحدث بشكل جيد عند تعرض الزراعات لدرجات متباينة من الحرارة 26 °م نهاراً ، 15 °م ليلاً وقد اقترح Gautheret أن درجة الحرارة العالية نهاراً تشجع على تخليق الكامبيوم فى حين تشجع درجات الحرارة المنخفضة على تكشف الكامبيوم إلى مبادئ خروج الجذور ليلاً .

هيئة ونوع الغازات فى حيز الزراعة
أن التغيرات التى تطرأ على الأنسجة النباتية المنزرعة على بيئة غذائية قد تعود إلى هيئة ونوع الغازات فى حيز الزراعة (الأنبوبة أو دورق الزراعة) فقد وجد أن تعريض عنق الأنبوبة للهب أثناء تعقيمها يزيد من تركيز غاز الإثيلين وأن معظم هذه الغازات تخرج من حيز الأنبوبة إذا كان الغطاء محكم فإن تركيز الإثيلين يبقى لفترة طويلة فتؤدى التركيز العالى منه إلى زيادة تكون Callus غير أن هناك تأثيرات ضارة لغاز الإثيلين أهمها إعاقة تخصص الأنسجة لتكوين الأعضاء . كذلك وجد أن الأنسجة المنزرعة تبدأ فى إنتاج غاز الإثيلين بفعل وجود الأوكسين فى الوسط الغذائى خاصة IAA , 2,4-D. كذلك ينتج غاز CO2 من الأنسجة أثناء تنفسها وهو ينافس غاز الإثيلين فى تأثيراته على الأجزاء المنزرعة.

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:16 AM
إجراءات زراعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11336/)الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11336/)العامة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11336/)general procedures (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11336/)
أ‌-تحضير البيئة Stocks and media preparation (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11336/)
ب‌-اختيار نبات الأم Selective of mother plants
جـ-اختيار المنفصل النباتى Choice of Explant
د – تعقيم المنفصل النباتى Sterilization and washing of the explant
هـ- نقل الجزء المستعمل لسطح البيئةTransfer of the explant to the medium
و – الظروف البيئية للمزرعة Culture environment
ط- تخليق الأعضاء أو الكشف المورفولوجى Morphogenesis
ك – تقسية النبات قبل النقل للتربة Hardening of plants
أ – تحضير البيئة Stocks and media preparation :

أولا: تحضير Stocks
تشمل تلك الخطوة إعداد Stock من مكونات البيئة المختلفة وتخزينها على درجة 4 – 5 م لحين استعمالها وذلك لتوفير الوقت والجهد اللازم لوزن الأملاح والفيتامينات والهرمونات الواجب تواجدها فى لتر من البيئة الغذائية . وسوف نسوق مثالاً لتحضير بيئة Murashige & turck ويتم ذلك بوزن وزنة كبيرة من كل ملح تساوى عشرة أضعاف الكمية لتحضير لتر من البيئة . وعند تحضير البيئة يؤخذ منها عشر حجمها فقط فعند تجميع تلك الكميات من Stocks المختلفة نحصل على التركيزات المطلوبة لتحضير لتر من البيئة . هذا بالنسبة للأملاح أما بالنسبة للفيتامينات فيوزن من كل فيتامين 100 ملليجرام تذاب فى 100 مل ماء مقطر وعند الاستعمال يؤخذ واحد مل من هذا Stock والذى يعنى احتوائه على مليجرام من الفيتامين أو الهرمون . وتجدد Stock مرة كل شهر . ويجب الأخذ فى الاعتبار أن الهرمونات لا تذوب فى الماء فالكينتين مثلاً يذوب فى محلول قلوى أما البنزيل أدنين فلا يذوب فى الماء ويذوب فقط فى حمض الهيدروكلوريك أما الأكسين فيذوب فى الكحول أو هيدروكسيد البوتاسيوم.


جدول ( 8) يوضح مثالاً لتحضير Stocks مختلفة لبيئة Murashige & Turck
Item

Compound

Stock solution

Use 1/L

Final concentration

A

CaCl2.2H2O

4.4 g/100 ml

10

440

B

NH4NO3 KNO3

16.5 g/1000 ml

19.0 g/1000 ml

100

1650

1900

C

MgSO43.7 g

10 370
MnSO4

0.17 g/100 ml

170

ZnSO4

0.086 g

8.6

CuSO4

0.05 ml

0.025

D

KI

CoCl2

1 ml prestock

0.25 ml prestock

10

0.83

0.025

E

KH2PO4

H3BO3

NamoO4

1.7 g

0.062 g

0.25 ml prestock

10

170

6.2

0.25

F

FeSO4

NaEDTA

0.278 g

100 ml

0.372 g

27.85

37.25

add EDTA to hot water stir in FeSO4 for 1/2 hr,

Prestocks ( all 100mls )

CuSO4.5H2O

KI

CoCl2.6H2O

NaMoO4.2H2O

100 mg/100 ml

830 mg/100 ml

100 mg/100 ml

1 g/100 ml

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:18 AM
زراعة الورد بطريقة زراعة الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11391/)Rapid propagation of roses in vitro

من المعروف أن الورد يتكاثر بالتطعيم البرعمى على أصول ورد النسر ولكن فى (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11391/)الأونة الأخيرة ظهرت عدة سلالات من الورد أمكن انتخابها يمكن أن تتكاثر على جذورها أى دون الحاجة لإجراء عملية التطعيم على أصول معينة ومن هنا ظهرت الحاجة إلى وسيلة للتكاثر السريع. لذلك تستخدم وسيلة زراعة الأنسجة لتحقيق هذا الهدف.


الأدوات المستخدمة The equipment :
·أنابيب اختبار ( 25 × 150 مل ) تحتوى على M&S .

·دوارق مخروطية تحتوى على ماء مقطر.
·قطع من ورق الترشيح.
·أطباق بترى معقمة.
·ملقط ومشرط.
·نباتات ورد من الأصناف المنتخبة.
·دورق مخروطى يحتوى على كحول 70 %.
·دورق مخروطى يحتوى على محلول صوديوم هيبوكلوريد 20 %.



·موقد كحولى.


البيئة The media :
تستخدم بيئة أملاح Murashige and Shoog بالإضافة إلى:


Sucrose 4%


Inositol


100 mg/l


Thiamin Hcl


10 mg/l


Pyrodoxine Hcl


10 mg/l


Nicotinic acid


10 mg/l


Glycine


2 mg/l


Agar


0.6 %


BA


2 to 8 mg/l


NAA


0.04 to 4 mg/l












يضبط الـ PH على 5.5 وتعقم البيئة على 121 م لمدة 15 دقيقة .






بيئة التجزير:

تحتوى على بيئة M&S بالإضافة إلى




Sucrose


4 %


NAA


0.05 – 0.1 mg/l


Agar


0.6 %









النسيج المستخدم Explant :
تعزل البراعم الجانبية Axillary bud من نباتات الورد النامية بالصوبة وذلك من الأصناف التالية :




1- King`s Rouson .

2- Plantiful .

3- Parada ( a climbing form ) .

4- Fragrant cloud .

5- Lili Morlene .

6- Garnet yellow .

7- Paul`s lemon pillar ( a climber ) .


الإجراءات Procedure :

1-تعزل البراعم الجانبية من النباتات النامية فى الصوب أو الحقل وتعقم بالصوديوم هيبوكلوريد لمدة 20 دقيقة ويعقب ذلك غسلها عدة مرات بالماء المقطر . 2-تنقل البراعم على البيئة الغذائية وتحضن على درجة حرارة 20 – 25 م وإضاءة 400 – 1000 Lux لمدة 16 ساعة .3-بعد تكون الـ Shoot تنقل النموات الخضرية على بيئة تكوين الجذور .4-تنقل النباتات بعد عملية التقسية بتعرضها لإضاءة 10000 Lux لمدة أسبوع وبعدها تنقل إلى إصيص تحتوى على البيت والرمل وذلك تحت الـ Mist .





أخذ النتائج Recording of results
دون مشاهداتك فى جدول للأصناف المستخدمة تحت تأثير المستويات المختلفة من الهرمونات . وتقدر النتائج فى صورة متوسط عدد النموات الخضرية لكل Explant وذلك بعد 4 أسابيع من الزراعة وبعد تحضينها على درجة 20 درجة مئوية ولإضاءة قدرها 400 Lux و على بيئة M&S بالإضافة إلى GA3 بتركيز 0.1 ppm .


NAA mg/l

Cultivar

BAP

Concentration

ppm

2

4

8

0.04

-

0.4

-

4.0

-

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:19 AM
زراعة القمة النامية للطماطم Apical shoot tip culture of tomato

يستخدم تكنيك زراعة الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11393/)كوسيلة من وسائل التكاثر (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11393/)الخضرى (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11393/)وفى نفس الوقت لإنتاج نباتات خالية من الفيروس أو لإنتاج أعداد كبيرة من نباتات الهجن التى تستخدم فى (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11393/)زراعة الصوب الزراعية المستخدمة حديثاً فى مصر ونظراً لارتفاع أسعار بذور الهجن.


الأدوات المستخدمة The equipment
·أنابيب اختبار تحتوى على أملاح بيئة Murshige & Skoog بدون هرمونات أو فيتامينات مع إضافة أجار 0.8 %.

·أنابيب اختبار على بيئة الأجار بالإضافة إلى المستويات المختلفة من الهرمونات.
·بذور طماطم من صنف Money marker أو إحدى الهجن المستخدمة.
·دورق مخروطى (250 مل) يحتوى على 20 % صوديوم هيبوكلوريد .
·دورق مخروطى (250 مل) يحتوى على 200 سم كحول إيثانول 70 %.
·مشرط وملقط.
·أطباق بترى معقمة.
·ميكروسكوب.
·موقد كحولى.
·قطع من الشاش 10 × 10 سم.



البيئة The medium
1-بيئة Murshige & Skoog بدون إضافة هرمونات أو فيتامينات.

2-بيئة لتنمية القمة النامية وتحتوى على أملاح Murshige & Skoog وفيتامينات Gamborg et al 1968 بالإضافة إلى 100 مليجرام / لتر Inositol و30 جرام / لتر سكروز بالإضافة إلى 8 جرام / لتر أجار ، يضبط الـ PH على 5.6 بإضافة نقط من محلول HCl or NaOH ثم تعقم البيئة على 121 م لمدة 15 دقيقة.



الجزء المستخدم Explant
تزرع بذور الطماطم وعندما تصل البادرات عمر 10 أيام من الإنبات تعزل القمة النامية وتحتوى على القمة المرستيمية بالإضافة إلى واحد أو اثنين من مبادئ خروج الأوراق ويتم العزل تحت الميكروسكوب بما لا يزيد طول القمة عن 0.5 سم .




الإجراءات Procedure
1-تعقم بذور الطماطم صنف المينى ميكر أو أى بذور هجن بوضعها فى قطعة من القماش تغمس فى كحول 70 % لمدة 5 دقائق ثم يعقبها الغمس فى محلول الصوديوم هيبوكلوريد لمدة 15 دقيقة.

2-تغسل البذور عدة مرات فى ماء مقطر معقم.
3-تنقل كل 2 – 3 بذور على بيئة تنمية البذور وتعقم فوهة الأنبوبة وتغطى بورق الألمونيوم وتوضع الأنابيب داخل كيس بلاستيك.
4-تحضن الأنابيب فى الإظلام داخل حضانة على درجة 27 م لمدة 15 – 20 يوم.
5-عندما يبلغ طول البادرات 10 سم تنقل إلى طبق بترى وتعزل القمة النامية تحت الميكروسكوب
6-تنقـل القمـة الناميـة إلـى سطـح البيئـة مـع تركيـزات مختلفـة مـن الكينيتيـن( 0.1, 1.0, 5.0, 10 uM ) بتركيــزات مختلفــــة من الـ ( 0.1 , 1.0 , 5.0 , 10 uM ) IAA & NAA .
7-يتم نقل النموات إلى بيئة جديدة Subculture كل 40 يوم وذلك بتعريض البيئة إلى إضاءة 1000 قدم / شمعة لمدة 16 ساعة يومياً ودرجة حرارة 27 م.
8-يتم عمل تقسية للنباتات وتنقل إلى إصيص وتعرض إلى Mist قبل نقلها إلى الصوبة ثم إلى أرض المشتل.



أخذ النتائج Recording of result
فى تجربة Novak & Moskova 1979 درست تأثير تركيزات مختلفة من الكينيتين عند إضافة كلا من NAA & IAA . ويكرر العمل للتأكد من النتائج واستنتج من البيانات المتحصل عليها العلاقة بين الأوكسين والسيتوكينين فى تأثيرها على كلا من تكشف النموات الخضرية والجذرية والكالس.

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:19 AM
تكاثر التفاح بزراعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11392/)الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11392/)Propagation of apple by tissue culture

يمكن استخدام تكنيك زراعة الأنسجة فى (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11392/)تكاثر أصول التفاح التى يتم استيرادها من الخارج مثل أصول مالنج مورتن 106 و 111 والمستخدمة فى تطعيم أصناف التفاح التى توجد فى مصر مثل صنف الانا وعين شمر. ويستخدم هذا التكنيك من أجل مساعدة رجل المشتل على خفض تكلفة إنتاج شتلة التفاح والذى يرجع تمنها إلى استيراد الأصول سابقة الذكر . كذلك يستخدم هذا التكنيك فى مساعدة مربى النبات على نشر السلالات الجيدة والتى يمكن انتخابها بوسيلة سريعة إذا ما قورنت بالطرق التقليدية للتكاثر.


الأدوات المستخدمة The equipment
·أنابيب اختبار 25 × 150 مل تحتوى على بيئة أجار Murashige & Skoog

·أنابيب اختبار تحتوى على بيئة أجار للتجذير.
·أنابيب اختبار تحتوى على بيئة التجذير السائلة مع استخدام كوبرى من ورق الترشيح.
·دوارق مخروطية 150 مل تحتوى على 15 سم من بيئة التجذير السابقة.
·ثلاثة دوارق مخروطية 250 مل تحتوى على 200 مل ماء مقطر.
·2 دورق مخروطى 250 مل تحتوى على 200 مل محلول صوديوم هيبوكلوريـد 0.5 % (من الكلوروكس التجارى تركيز 10 %) مع إضافة 0.1 % مادة ناشرة Tween 20 .
·مشرط وملقط 150 ملم.
·هزاز أفقى.
·موقد كحولى.
·دورق مخروطى يحتوى على 200 مل كحول إيثانول 70 %.


أعلى الصفحة (http://www.alhadeeqa.com/vb/arbah.php?url=%61%48%52%30%63%44%6f%76%4c%33%64%33 %64%79%35%7a%62%58%4e%6c%59%79%35%6a%62%32%30%76%5 9%58%49%76%5a%57%35%6a%65%57%4d%76%63%47%78%75%64% 46%39%79%5a%58%42%79%62%32%51%76%63%48%41%78%4e%69 %35%6f%64%47%30%6a%64%47%39%77)


البيئة The media
تستخدم بيئتان أحدهما لتنمية الـ Explant لتكوين Shoots والأخرى لزراعة Microcutting لإخراج الجذور العرضية عليها .

1-بيئة Shoot
تحتوى على أملاح وفيتامينات Murashge & Skoog بالإضافة إلى


-BA 10 uM

-Sucrose 30 g/l

-Agar 8 g/l

2-بيئة Rooting
تحتوى على نصف قوة الأملاح فى بيئة M & S بالإضافة إلى إحدى الأوكسينات الآتى أسماءها بتركيز10 uM

- Indolebutric acid IBA

- Naphthalene acetic acid NAA

- B naphthoxy acetic acid NOA

تضاف للبيئة إحدى الفينولات مثل : Phloroglucinal ( 1,3,5, trihydroxy benzene ) بتركيز 164 مليجرام / لتر للحصول على ما يعرف باسم Synergistically with auxin



الجزء المستخدم Explant
تزرع القمة النامية لنباتات أصل النارنج MM 106 النامية فى الصوبة أو تستخدم البراعم الإبطية . وذلك بالحصول على نموات خضرية من أفرع خالية من الفيروس بطول 2 – 5 سم وتعقم سطحياً ويعزل منها القمة النامية بطول 1 سم أو تعزل البراعم الجانبية بعد إزالة الأوراق وتزرع على البيئة المناسبة لنمو النموات الخضرية وبعد 30 يوماً تقسم إلى عقل ورقية بطول 2.5 – 3 سم وتنقل إلى بيئة التجذير .




الإجراءات Procedures
1-نحصل على النموات الخضرية بطول 2- 5 سم وتعقم سطحياً بغمسها فى الكحول 70 % لمدة 5 دقائق ثم فى محلول هيبوكلوريد الصوديوم لمدة 15 دقيقة ثم تغسل 3 مرات بماء مقطر معقم.

2- تقطع النموات الخضرية إلى قمم نامية بطول 1 سم أو إلى قطع بطول 1 سم تحتوى على برعم إبطى بعد إزالة الأوراق وتنقل على سطح البيئة.
3- تحضن Explant على درجة حرارة 25 م وإضاءة 600 قدم / شمعة بحيث تكون لمبات الإضاءة أعلى الأنابيب بحوالى 25 سم.
4- بعد 30 يوم تنقل النموات الخضرية الناتجة وتقسم إلى عقل ورقية بطول 2.5 – 3 سم .
5- تنقل العقل الورقية إلى بيئة التجذير وذلك باستخدام:
أ‌-أنابيب تحتوى على بيئة التجذير المضاف إليها أجار بتركيز 0.8 % .
ب‌-أنابيب تحتوى على بيئة التجذير مع استعمال كوبرى من ورق الترشيح واتمن رقم 1.
ج- دوارق مخروطية تحتوى على بيئة التجذير وتوضع على هزاز يهتز بمعدل 70 هزة فى الدقيقة.
6- تعرض الـ Microcutting إلى درجة حرارة 26 درجة م وإضاءة مستمرة بشدة 600 قدم / شمعة.
7- بعد حدوث التجذير يتم عمل تقسية للنباتات الناتجة قبل قبل نقلها وذلك بتعرضها إلى إضاءة 1000 قدم / شمعة ثم تنقل بعد ذلك تحت الرزازى داخل الصوبة. وذلك بزراعة كل نبات داخل إصيص يحتوى على رمال والبيت بنسبة 1 : 1 .



أخذ النتائج Recording the results
قارن بين طبيعة البيئة الصلبة والسائلة كذلك قارن بين مصادر الأوكسين المختلفة والمستخدمة فى إحداث التجذير لتحديد أفضلهم. كذلك قارن بين استخدام الأوكسين منفرداً أو مصاحبته لإحدى الفينولات مثل Phloroglucinal ( PG ) وسجل قراءاتك فى الجدول التالى :


Culture methods

Mean number of roots per cutting

NAA

IBA

NOA

Phloroglucinal

NAA

IBA

NOA

Liquid medium with bridges

Shaken liquid medium

Agar medium

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:19 AM
الدروس العملية (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)فى (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)مجال (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)التكاثر (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)الخضرى (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)بزراعة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)الأنسجة




التكاثر الخضرى للأوركيد vegetative (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)propagation (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)of orchids
عزل وزراعة القمة النامية للقرنفل Isolation and culture of the shoot tip of carnation
زراعة القمة النامية لنبات الفيكس Ficus shoot tip culture for rapid clonal propagation
زراعة الورد بطريقة زراعة الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)Rapid propagation of roses in vitro
أنسجة الكلس الجسمية Clonal propagation of citrus from somatic callus
إكثار النخيل بزراعة الأنسجة (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/)Propagation of date palm (phoenix dactylifa L) in vitro
التكاثر السريع للموز باستخدام القمة النامية Rapid multiplication of Banana by in vitro shoot tip culture
تكاثر التفاح بزراعة الأنسجة Propagation of apple by tissue culture
تخليق النموات الخضرية للبيكان عند زراعة أنسجتها In vitro proliferation of pecan shoots
التكاثر الخضرى السريع للأسبرجس باستخدام البراعم الجانبية Rapid vegetative propagation of Asparagus through lateral bud culture
زراعة القمة النامية للطماطم Apical shoot tip culture of tomato
تكاثر البطيخ معملياً In vitro propagation of watermelon
تكاثر الثوم بزراعة الأنسجة Propagation of Garlic tissue culture

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:20 AM
التكاثر الخضرى للأوركيد Vegetative propagation of orchids

هذه التجربة مثال للاستخدام تكنيك زراعة الأنسجة كوسيلة من وسائل التكاثر الخضرى فى نباتات أحادية الفلقة وهو من النباتات صعبة الإكثار خضرياً كما هو معروف مقارنتاً بالنباتات ثنائية الفلقة ويستخدم فى التكاثر هنا الأنسجة المرستيمية المأخوذة من كور مات الأوركيد وتزرع على بيئة بسيطة تحتوى على فيتامين ب.

الأدوات المستخدمة The equipment
·أنابيب اختبار (25 – 120 مم ) تحتوى على 10 سم من بيئة الآجار المائلة بزاوية 25.
·20 قطعة من ورق الترشيح ( 200 × 200 ءمم ).
·دوارق مخروطية (25 مل ) ذات غطاء من ورق الألمونيوم تحتوى 200 مل من الماء المقطر.
·أطباق بترى ذات قطر 50 مل.
·10 قطع من أوراق الألمونيوم (100 × 100 ).
·ملقط ( 120 – 150 سم ).
·2مشرط (120 سم ) ذو سلاح نمرة 11.
·درنات الأوركيد Bulb of cymbidium .
·حامل الأنابيب.
·كأس زجاجى (250 مل ) تحتوى على 200 مل من محلول كلوركس 20 % مضاف إليه نقطتين من مادة ناشرة مثل Tween 20 .
·كأس (250 مل ) يحتوى على 200 مل كحول الايثانول 95 %.
·قلم تعليم Waterproof marking pen .
·ميكروسكوب.
·ملقط ذو حافة حادة.
·موقد كحولى أو بنزن.
·دورق مخروطى يحتوى على 100 مل كحول 95 %.



البيئــــة The media

تتكون البيئة الغذائية على أملاح Murashige & Skoog 1962 بالإضافة إلى


Sucrose


2 %


Nicotinic acid


0.5 mg/l


Pyrodoxin HCl


0.1 mg/l


Thiamin HCl


0.1 mg/l


Glycine


3.0 mg/l


Agar


0.8 mg/l












يتم ضبط PH على 5.8 ثم تعقم البيئة على درجة 121 ( 15 دقيقة ) .


الجزء المستعمل فى الزراعة Explant :

يتم نزع البصيلات الكاذبة Pseudobulbs من النبات ثم يفصل باحتراس كل الأوراق القديمةحتى نحصل على البصيلة كما فى الشكل ويكون المرستيم ما زال مغطى ببعض الأوراق الصغيرة انزع البرعم الجانبى Side bud بالمشرط واغمسها فى الكحول 95 % لمدة 5 ثوانى وانزعها وهزها حتى نتخلص من الكحول ثم اغمسها فى محلول هيبوكلوريد الصوديوم لمدة 25 دقيقة. انقل الأنسجة المعقمة داخل غرفة العزل Hood فى ماء مقطر بعد غسلها ثلاث مرات للتخلص من أثار الهيبوكلوريد .


الإجراءات Precedures

1.بعد نقل البراعم إلى داخل كابينة العزل نضع كل برعم فى طبق بترى وبعناية ننزع الأوراق الصغيرة الحرشفية.
2.تغمس البراعم فى كحول ايثايل 95 % وتشطف 2-3 مرات بالماء المقطر المعقم ونترك مع كل برعم 2-3 مبادئ الأوراق Leaf primordial بالإضافة إلى المرستيم ويتم ذلك العزل تحت الميكروسكوب وبواسطة مشرط حاد معقم بغمسه فى الكحول وحرقه على اللهب.
3.ينقل المرستيم إلى سطح البيئة وتحضن الأنابيب على درجة 25 م +2 وإضاءة قدرها 2000 Lux .
4.بعد 8 أيام سوف يتحول لون المرستيم إلى اللون الأخضر يترك أسبوعين آخرين حتى تتكون الكورمه والتى تقسم إلى 4-6 قطع باستخدام مشرط حاد وتنقل الأجزاء المقطوعة على بيئة جديدة لها نفس التركيبة السابقة. وتعقم فوهة الأنابيب وتغلق باستعمال سدادات من ورق الألمونيوم.
5.سرعان ما تتطور كل جزء مزروع إلى Prorocorm جديد.


أخذ النتائج Recording of result

سجل النتائج والملاحظات ونسبة النجاح فى المواعيد التى يبينها الجدول التالى :


ملاحظات
نسبة النجاح
اليوم
تنقل النباتات لأرض المشتل . النتائج
عزل المرستيم
تحول المرستيم إلى اللون الأخضر
تكون الـ Protocorm
تقسيم الـ Protocorm إلى 4-6 أجزاء وزراعتها
اكتمال تكون الكورمات

الامبراطور - عين دالة
04-06-2012, 11:21 AM
2 - عزل وزراعة القمة النامية للقرنفل Isolation and culture of the shoot tip of carnation

تستخدم زراعة القمم النامية لإنتاج أعداد كبيرة من النباتات فى حالة الرغبة فى استخدام ذلك التكنيك كوسيلة للتكاثر الخضرى مما يؤدى إلى خفض تكاليف إنتاج بعض النباتات الغالية الثمن أو التى يكون هناك صعوبة فى إكثارها كما يستخدم ذلك التكنيك للحصول على نباتات خالية من الفيروس كما فى النارجس والداليا والفراولة.

الأدوات المستخدمة The equipment

·أنابيب اختبار تحتوى على البيئة الغذائية المائلة بدرجة 25 م.
·عقل طرفية من القرنفل.
·زوج من الملاقط (120 سم).
·مشرط ذو سلاح حاد رقم 11.
·ميكروسكوب.
·ثلاثة أطباق معقمة.
·ثلاثة كاسات ( 250 مل ) يحتوى كل منهما على 200 مل ماء مقطر معقم للغسيل.
·كحول 70 %.
محلول هيبوكلوريد الصوديوم 20 %.


الجزء المستعمل فى الزراعة Explant :

تستعمل القمة النامية للنباتات ويمكن الحصول عليها بعد نقع عقل نباتات القرنفل وتعقيمها سطحياً بالكحول 70 % لمدة دقائق ثم غسلها بالماء ونقلها إلى كابينة العزل.

البيئـــــة The media :

يستخدم بيئة الآجار والتى تتكون من أملاح Murashige and Skoog بالإضافة إلى الآتى :


3 % Sucrose

Thiamin HCl

0.4 mg/l

Inositol

100 mg/l

IAA

0.3 mg/l

Kinetin

1.0 mg/l

Agar

0.2%



يضبط الـ PH على 5.7 ثم يضاف الآجار ويوزع على الأنابيب 25 × 150 مل بواقع 20 مل لكل أنبوبه ثم تغطى الأنابيب باستعمال أغطية من الـ Polyproplene .

الإجراءات Procedures

1.تنزع الأوراق الكبيرة من على عقل القرنفل ثم يأخذ الجزء الطرفى بطول0.5 بوصه والتى تعقم فى الكحول لمدة 5 دقائق ثم ينقل إلى كأس به محلول هيبوكلوريد الصوديوم 20 % ويغسل بالماء عدة مرات.
2.يتم تحت الميكروسكوب وباستخدام المشرط نزع الأوراق وتترك فقط زوج من مبادئ الأوراق Primordial Leaf بالإضافة للقمه النامية.
3.تنقل القمة النامية لسطح البيئة وتعقم فوهة الأنابيب على اللهب وتغطى
4.تحضن الأنابيب على درجة 25 م وإضاءة 100 شمعه / قدم
5.بعد 3-4 أسابيع عندما تكون النموات الخضرية طولها بوصه تنقل على سطح بيئة جديدة لا تحتوى على كلاً من الأوكسين والستوكينين مع زيادة شدة الإضاءة إلى 1000 Lux فتتكون الجذور بعد 4 أسابيع أخرى ثم يتم نقل النباتات المتكونة إلى أصص تحتوى على مخلوط زراعى معقم وتنقل تحت Mist حتى تتأقلم.

جدول العمل

·عزل القمة النامية وزراعتها على بيئة Murashige and Skoog مع IAA 0.3 + Kn 1.0 ppm .
·نقل النموات الخضرية المتكونة على البيئة السابقة الخالية من الهرمونات .
·نقل النباتات المتكونة داخل أصص بلاستيك تحت Mist أو تغطى بكأس داخل حضانة على نفس الإضاءة والحرارة.


Share (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/#)
Share this post on
http://www.alhadeeqa.com/vb/vbseo/resources/images/forum/digg.gifDigg (http://digg.com/submit?phase=2&url=http%3A%2F%2Fwww.alhadeeqa.com%2Fvb%2Fgardens% 2Fg11390%2F%23post60525&title=10-%D8%A7%D9%84%D8%AF%D8%B1%D9%88%D8%B3+%D8%A7%D9%84% D8%B9%D9%85%D9%84%D9%8A%D8%A9+%D9%81%D9%89+%D9%85% D8%AC%D8%A7%D9%84+%D8%A7%D9%84%D8%AA%D9%83%D8%A7%D 8%AB%D8%B1+%D8%A7%D9%84%D8%AE%D8%B6%D8%B1%D9%89+%D 8%A8%D8%B2%D8%B1%D8%A7%D8%B9%D8%A9+%D8%A7%D9%84%D8 %A3%D9%86%D8%B3%D8%AC%D8%A9)
http://www.alhadeeqa.com/vb/vbseo/resources/images/forum/delicious.gifDel.icio.us (http://del.icio.us/post?url=http%3A%2F%2Fwww.alhadeeqa.com%2Fvb%2Fgar dens%2Fg11390%2F%23post60525&title=10-%D8%A7%D9%84%D8%AF%D8%B1%D9%88%D8%B3+%D8%A7%D9%84% D8%B9%D9%85%D9%84%D9%8A%D8%A9+%D9%81%D9%89+%D9%85% D8%AC%D8%A7%D9%84+%D8%A7%D9%84%D8%AA%D9%83%D8%A7%D 8%AB%D8%B1+%D8%A7%D9%84%D8%AE%D8%B6%D8%B1%D9%89+%D 8%A8%D8%B2%D8%B1%D8%A7%D8%B9%D8%A9+%D8%A7%D9%84%D8 %A3%D9%86%D8%B3%D8%AC%D8%A9)
http://www.alhadeeqa.com/vb/vbseo/resources/images/forum/technorati.gifTechnorati (http://technorati.com/faves/?add=http%3A%2F%2Fwww.alhadeeqa.com%2Fvb%2Fgardens %2Fg11390%2F%23post60525)
http://www.alhadeeqa.com/vb/vbseo/resources/images/forum/twitter.pngTwitter (http://twitter.com/home?status=10-%D8%A7%D9%84%D8%AF%D8%B1%D9%88%D8%B3+%D8%A7%D9%84% D8%B9%D9%85%D9%84%D9%8A%D8%A9+%D9%81%D9%89+%D9%85% D8%AC%D8%A7%D9%84+%D8%A7%D9%84%D8%AA%D9%83%D8%A7%D 8%AB%D8%B1+%D8%A7%D9%84%D8%AE%D8%B6%D8%B1%D9%89+%D 8%A8%D8%B2%D8%B1%D8%A7%D8%B9%D8%A9+%D8%A7%D9%84%D8 %A3%D9%86%D8%B3%D8%AC%D8%A9 http%3A%2F%2Fwww.alhadeeqa.com%2Fvb%2Fgardens%2Fg1 1390%2F%23post60525)





http://www.alhadeeqa.com/vb/images/styles/Luburox_Green/misc/progress.gif http://www.alhadeeqa.com/vb/clear.gif رد مع اقتباس (http://www.alhadeeqa.com/vb/newreply.php?do=newreply&p=60525)




11-21-2011, 05:33 PM #4 (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardens/g11390/#post60526)
[/URL]
http://www.alhadeeqa.com/vb/avatars/1.gif?dateline=1274780750 (http://www.alhadeeqa.com/vb/gardener/g1/)
http://www.alhadeeqa.com/vb/rank/Surname1/a1.png
http://www.alhadeeqa.com/vb/images/styles/Luburox_Green/reputation/reputation_pos.png http://www.alhadeeqa.com/vb/images/styles/Luburox_Green/reputation/reputation_pos.png

الحالة
غير متصل
تاريخ التسجيل Feb 2008
الجنسيهـ jordanian
المشاركات
10,959
الديانة islam
الجنس http://www.alhadeeqa.com/vb/images/sex/1.gif
الدرجة العلمية Bachelor
التخصص التربه والري
الوظيفة مهندس حدائق
الإهتمام تصميم الحدائق وشبكات الري


http://www.alhadeeqa.com/vb/images/Twitter.png (http://twitter.com/alhadeeqa) http://www.alhadeeqa.com/vb/images/Facebook.png (http://www.facebook.com/amjaradat) http://www.alhadeeqa.com/vb/images/Youtube.png (http://www.youtube.com/user/alhadeeqa2010)


3 - زراعة القمة النامية لنبات الفيكس Ficus shoot tip culture for rapid clonal propaga

3- [U]زراعة القمة النامية لنبات الفيكس Ficus shoot tip culture for rapid clonal propagation

يستخدم تكنيك زراعة الأنسجة فى إنتاج أعداد كبيرة من نبات الفيكس باستخدام القمة النامية مما يؤدى إلى خفض تكلفة إنتاج النباتات مقارنتاً بالطرق التقليدية.

الأدوات المستخدمة The equipment
1.أنابيب اختبار تحتوى على بيئة M & S مائلة بدرجة 25 م.
2. عقل من نبات الفيكس.
3.ملقط صغير وآخر طويل.
4.مشرط ذو سلاح حاد رقم 11.
5.أطباق بترى معقمة.
6.ميكروسكوب مزود بإضاءة.
7.كحول ايثانول 70 %.
8.كحول 20 % من صوديوم هيبوكلوريد.


النسيج المستخدم Explant :

القمة النامية المأخوذة من العقل الطرفية لنبات الفيكس.


البيئـــة The media :

تستخدم بيئة أجار M & S بالإضافة إلى


3 % Sucrose

Inositol

100 mg/l

Thiamin HCl

0.4 mg/l

IAA

0.3 mg/l

6-isopentenyl adenine

30 mg/l

Agar

0.8%








يضبط الـ PH على 5.7 +- 1 ويذاب الأجار ويعبأ فى أنابيب وتعقم على درجة 121 لمدة 15 دقيقة.


الإجراءات Procedures :

1.افصل واحد وأكثر من الأوراق الغمدية حول قمة الساق الساكن حتى تصل إلى الأنسجة القاعدية اغمس الجزء السابق فى محاليل التعقيم ثم اغسلها بالماء المقطر للتخلص من آثار الكلور وانقل القمة النامية على سطح البيئة ثم عقم فوهة الأنبوبة قبل إغلاقها.
2.ضع الأنابيب فى الحضانة على درجة حرارة 25- 27 م وإضاءة قدرها 100 قدم / شمعه لمدة 16 ساعة يومياً .
3.بعد 4-6 أسابيع انقل النموات الناضجة على بيئة طازجة لها نفس التركيب السابق.
4.عندما يؤدى الـ Sub culture إلى تكوين العديد من الـ Shoots تقسم وتنقل كل Shoot على حدى وتزرع مرة أخرى على انفراد على نفس التركيزات السابقة من الهرمونات
5.انقل النموات الخضرية على بيئة التجذير تحتوى على نصف قوة تركيز الأملاح لبيئة M & S بالإضافة إلى الأكسين فقط بتركيز 0.5 مليجرام / لتر وعادة يضاف IBA أو NAA.
6.تنقل النباتات الناتجة تحت شدة إضاءة عالية 1000 قدم / شمعة لتقسيتها قبل نقلها إلى الأصص وزراعتها تحت ال استعداداً لنقلها إلى المشتل.

Adsense Management by Losha